22885.鹽析萃取蛋白質(zhì)分配行為研究

1、專業(yè)學(xué)位碩士學(xué)位論文鹽析萃取蛋白質(zhì)分配行為研究DistributionofProteininSaltingOutExtractionSystem作者姓名：王菱工程領(lǐng)域：生物王猩學(xué)號(hào)：指導(dǎo)教師：完成日期：大連理工大學(xué)DalianUniversityofTechnology大連理工大學(xué)專業(yè)學(xué)位碩士學(xué)位論文摘要鹽析萃取是利用物質(zhì)在有機(jī)溶劑與鹽構(gòu)成的互不相溶的兩相中的溶解度不同而實(shí)現(xiàn)分離的方法，己用于多種蛋白質(zhì)分離，如脂肪酶，重組人血清白蛋白，

2、免疫球蛋白G，淀粉酶，纖維素酶等，其對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)、活性具有良好的保護(hù)作用，且收率及除雜效果較好。除此之外，鹽析萃取特有的分相快，易操作，高效率，低毒性，易回收，低成本，易與其他分離技術(shù)偶聯(lián)的優(yōu)點(diǎn)，使其具有良好的工業(yè)大規(guī)模生產(chǎn)應(yīng)用前景。目前，鹽析萃取蛋白質(zhì)的研究處于對(duì)特定蛋白的具體分離條件探索中，其規(guī)律性研究尚未開(kāi)展。本文通過(guò)考察多種蛋白在不同鹽析萃取條件中的分配情況，對(duì)鹽析萃取分離蛋白進(jìn)行了規(guī)律性歸納總結(jié)，并在此基礎(chǔ)上，開(kāi)展了鹽析萃取偶

3、聯(lián)柱層析分離人血漿蛋白的研究。首先，研究了鹽與有機(jī)溶劑種類，pH，NaCl等因素對(duì)鹽析萃取自然體系成相的影響。乙醇鹽析萃取體系中，五種鹽成相范圍比較：檸檬酸鉀硫酸銨碳酸鉀磷酸氫二鉀碳酸鈉：磷酸氫二鉀鹽析萃取體系中，六種醇成相范圍比較：甲醇乙醇異丙醇正丙醇叔丁醇仲丁醇；pH降低，鹽析體系成相范圍縮?。籒aCl的添加顯著縮減了乙醇／檸檬酸鉀和乙醇／磷酸氫二鉀鹽析萃取體系相圖的鹽濃度范圍。其次，研究了鹽與有機(jī)溶劑種類，系線長(zhǎng)度，pH，NaCl

4、等因素對(duì)白蛋白在鹽析萃取體系中分配行為的影響，研究了11種蛋白本身疏水性與分子量對(duì)其分配行為的影響及分相時(shí)間影響因素。隨鹽離子強(qiáng)度增加，體系的鹽析作用增強(qiáng)，白蛋白由下相向上相分配，隨有機(jī)溶劑極性減小而由上相向下相分配；各類鹽析萃取體系中，系線越短，靠近臨界點(diǎn)體系，對(duì)蛋白萃取效果較好；添加3％NaCl的乙醇／磷酸氫二鉀體系顯著提高白蛋白收率；蛋白質(zhì)疏水性對(duì)其分配行為影響較大，疏水性越大，蛋白易于向下相分配，親水性蛋白受有機(jī)溶劑極性影響明顯

5、。鹽析萃取下相為連續(xù)相時(shí)，分相時(shí)間較短，且分相時(shí)間隨蛋白含量增加而增長(zhǎng)，有機(jī)溶劑極性減小而減小。最后，采用pH7，175％乙醇／20％磷酸氫二鉀鹽析萃取體系偶聯(lián)柱層析分離血漿蛋白。鹽析萃取過(guò)程中HSA與IgG的收率分別為977％，954％：疏水層析時(shí)，能夠一步得到純度為9856％(HPLC檢測(cè))的人血清白蛋白；對(duì)于IgG與白蛋白的疏水層析的混合峰，采用HipTrapQFF離子交換層析可制備純IgG和白蛋白，電泳分析顯示單帶，其中，HSA