新型親和反膠團系統(tǒng)及其蛋白質萃取特性研究.pdf

1、反膠團萃取技術在蛋白質等生物活性物質的分離領域中被廣泛研究.但是傳統(tǒng)的離子型反膠團在萃取過程中往往對蛋白質選擇性低以及使蛋白質失活,因此本文研制出新型親和非離子反膠團系統(tǒng),并對此反膠團系統(tǒng)在蛋白質分離純化過程中的萃取特性進行了系統(tǒng)的分析研究.通過兩液相合成的方法將非離子型表面活性劑(Span 85)分子結合親和型色素染料辛巴藍(CB)分子,并以正己烷為溶劑制備出CB-Span 85親和型反膠團系統(tǒng).利用水分測定儀和激光光散射儀對親和反膠

2、團的性質進行研究.結果表明,由于親和配基CB的引入,CB-Span 85反膠團的含水率(W<,o>),流體力學半徑(R<,h>),以及膠團聚集數(shù)(N<,ag>均比Span 85反膠團提高.親和反膠團對蛋白質的萃取率也隨CB濃度的增加而顯著增加,說明親和相互作用在萃取過程中起主導作用. 被萃取的蛋白質通過1mol/L NaCl溶液進行反萃,回收得到的蛋白質顯示出與天然態(tài)蛋白質完全相同的活性和二級結構,證明該親和反膠團系統(tǒng)良好的生

3、物相容性.助劑對反膠團萃取蛋白質的過程具有顯著的影響,因此本文考察了正己醇作為助劑對CB-Span 85親和反膠團性質及蛋白質萃取的影響.結果表明3 vol.﹪正己醇可增加反膠團的W<,o>、R<,h>和N<,ag>,從而使反膠團對蛋白質的萃取率提高16﹪,并且揭示出正己醇分子幾乎參與親和反膠團系統(tǒng)中每一個反膠團的形成,使反膠團界面層的曲率和硬度降低,界面層的流動性增加. 對親和反膠團系統(tǒng)中蛋白質分配平衡和萃取動力學進行了研究

4、.結果表明蛋白質的分配平衡等溫線可用Langmuir方程進行擬合,并且親和配基CB和助劑正己醇濃度的增加可顯著增加親和反膠團系統(tǒng)的萃取容量.萃取動力學實驗結果反映了液膜傳質阻力、空間位阻相互作用、親和相互作用和界面?zhèn)髻|阻力這幾種因素協(xié)同影響CB-Span 85親和反膠團系統(tǒng)萃取蛋白質的動力學傳質過程.最后將CB-Span 85親和反膠團系統(tǒng)應用于實際蛋白體系的萃取分離.通過一次萃取可以使粗雞卵清白蛋白中溶菌酶的純化因子達到23.并且在反