豬囊尾蚴AgB基因氨基端和羧基端片段與豬CD58基因共表達(dá)DNA疫苗的構(gòu)建及其免疫活性的初步分析.pdf

1、新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文豬囊尾蚴AgB基因氨基端和羧基端片段與豬CD58基因共表達(dá)DNA疫苗的構(gòu)建及其免疫活性的初步分析姓名：侯俊玲申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：才學(xué)鵬;岳城20040601新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文 1摘 要 國(guó)內(nèi)外研究證明 用豬囊尾蚴 A g B 重組疫苗或 D N A 疫苗免疫小鼠或豬能有效地抵御豬帶絳蟲蟲卵的攻擊感染 本實(shí)驗(yàn)選取了豬囊尾蚴 A g B 氨基端 A g B - N8 0 8 b p和羧基

2、端 A g B - C9 4 3 b p作為免疫原基因 并以共刺激分子豬 C D 5 8 基因?yàn)樽魟┗騺順?gòu)建真核表達(dá)載體 P B N和 P B C 分別研究它們免疫 B A L B / c 小鼠后所產(chǎn)生的免疫應(yīng)答 從而為進(jìn)一步研制豬囊尾蚴D N A疫苗打下基礎(chǔ) 本實(shí)驗(yàn)從 C o n A活化的豬外周血單個(gè)核細(xì)胞 P B M C 提取總 R N A 用R T P C R 方法擴(kuò)增出 8 0 0 b p的片段 將擴(kuò)增產(chǎn)物連接到克隆載體中 經(jīng)

3、酶切鑒定 P C R 分析以及確證性測(cè)序后證明 所克隆 8 0 0 b p的片段含 C D 5 8基因完整的開放閱讀框 其核苷酸序列和氨基酸序列與國(guó)外發(fā)表的豬 C D 5 8 基因的同源性分別為 9 9 . 4 % 和 9 9 . 2 % 先將 C D 5 8插入雙啟動(dòng)子真核表達(dá)載體 p B u d C E 4 . 1 的 E F - 1 á 啟動(dòng)子下游 構(gòu)建表達(dá)載體 P C D 再分別將 A g B - N 和 A g B

4、- C 插入 P C D 的 C M V 啟動(dòng)子下游 制備 D N A 疫苗 P B N 和 P B C 分別免疫 4 周齡雌 B A L B / c 小鼠 2 周后加強(qiáng)免疫一次 每周用 E L I S A 檢測(cè)小鼠血清中的抗體水平 隔周用 M T T 法檢測(cè)小鼠脾淋巴細(xì)胞的增殖反應(yīng) 結(jié)果表明 D N A 疫苗 P B N 和 P B C 均可引發(fā)機(jī)體產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫 且 P B N 引發(fā)的細(xì)胞免疫強(qiáng)于體液免疫 P B C 引發(fā)