榮昌豬、長白豬免疫相關基因FKBP5的克隆、表達以及其表達蛋白質(zhì)活性分析.pdf

1、本實驗用RACE、qPCR、Western Blot、基因克隆、測序、表達蛋白等方法，克隆了榮昌豬、長白豬FKBP5基因cDNA全長、構建了FKBP5組織表達譜、表達純化了FKBP5蛋白，得到了如下結(jié)果:
　　1、利用3'，5'末端快速擴增法(Rapid Amplification of cDNA Ends techniques，RACE)從榮昌豬和長白豬胸腺組織中首次克隆出榮昌豬、長白豬FKBP5基因。榮昌豬FKBP5基因cDN

2、A全長為4119 bp，CDS區(qū)長為1374 bp，編碼458個氨基酸的多肽，在5'端和3'端分別含有212 bp和2533bp的非編碼區(qū);長白豬FKBP5基因cDNA全長為4164bp，CDS區(qū)長為1374bp，編碼458個氨基酸的多肽，在5'端和3'端分別含有255bp和2535bp的非編碼區(qū)。
　　2、運用qPCR和Western Blot技術檢測了該基因在榮昌豬和長白豬不同組織中的mRNA和蛋白表達譜，并且分析了FKBP5

3、 mRNA在榮昌豬和長白豬各組織中的表達差異。研究結(jié)果表明，在所檢測的組織中，心、肝、脾、肺、腎、胃、腦、肌肉、性腺、胸腺中均有FKBP5基因表達，其中，在先天免疫相關組織胸腺中表達豐度最高，且顯著性高于其它組織，并且FKBP5基因在長自豬胸腺組織中的表達量顯著性高于榮昌豬胸腺組織表達量。
　　3、分別將榮昌豬、長白豬CDS區(qū)克隆進原核表達載體pET-28a，構建好的表達載體轉(zhuǎn)化Rosetta蛋白表達菌，分離純化出具有活性的榮昌豬