26592.產(chǎn)phb隱藏嗜酸菌dx11選育及代謝途徑研究

1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文產(chǎn)PHB隱藏嗜酸菌DX11選育及代謝途徑研究姓名：徐愛玲申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：夏金蘭20100501中南大學(xué)博士學(xué)位論文摘要?jiǎng)e為24、75、24、12時(shí)菌株DXl1積累PHB的情況，結(jié)果顯示起始C／N比為24時(shí)PHB的產(chǎn)量為088g／lg細(xì)胞干重，所需要的時(shí)間也最短。對(duì)不同C／N比條件下菌株DXl1蛋白質(zhì)表達(dá)差異進(jìn)行分析，結(jié)果顯示酮醇酸還原異構(gòu)酶、醇醛酮還原酶、磷酸甘油酸變位酶、葡萄糖磷酸化酶、蘋

2、果酸脫氫酶和烯醇化酶的表達(dá)在C／N為24時(shí)有明顯提高。蛋白質(zhì)差異表達(dá)的方法沒能找到PHB合成相關(guān)的蛋白質(zhì)。但是此結(jié)果顯示PHB的積累除與糖代謝相關(guān)外還與胞內(nèi)蛋白質(zhì)代謝、脂質(zhì)代謝、核酸代謝和轉(zhuǎn)錄翻譯等因子具有重要關(guān)系。用Real—TimePCR方法對(duì)挑取的19個(gè)蛋白質(zhì)點(diǎn)在RNA水平上進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示19個(gè)蛋白質(zhì)的表達(dá)情況與對(duì)應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄情況基本一致。對(duì)隱藏嗜酸菌PHB代謝途徑作了分析。首次以已報(bào)道全基因組序列的Acidiphiliumc

3、ryptumJF5的功能基因?yàn)閰⒖?，選擇了PHB代謝相關(guān)的13個(gè)基因作為研究對(duì)象，用RealTimePCR方法對(duì)不同C／NL卜情況下這些基因的轉(zhuǎn)錄情況進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示p羥基丁酸聚合酶和乙酰輔酶A合成酶在PHB代謝中起了非常重要的作用。菌株DXl1積累PHB的起始底物是乙酸，并且找到了一條完整的PHB代謝途徑。對(duì)13個(gè)基因的啟動(dòng)子序列進(jìn)行了預(yù)測(cè)，模體模型為35區(qū)：nGAnnACA和10區(qū)：11GAnnACA，中間間隔平均為20bp，該

4、模體序列與Ecoli并無明顯的相似性，表明他們可能有較低的轉(zhuǎn)錄活性或者他們有不同的調(diào)節(jié)機(jī)制。對(duì)微異養(yǎng)條件下DXl1以硫?yàn)槟茉捶e累PHB的情況做了研究。DXl1能以硫?yàn)槟茉淳徛L(zhǎng)，但加入少量葡萄糖后，生長(zhǎng)周期明顯縮短，細(xì)胞密度大大提高。結(jié)果顯示，以硫?yàn)槟茉吹呐囵B(yǎng)基中，加入01％的葡萄糖，PHB的產(chǎn)量達(dá)到1351g／L，與1％葡萄糖為能源時(shí)PHB產(chǎn)量相接近。用RealTimePCR方法對(duì)硫、葡萄糖、硫葡萄糖等六種培養(yǎng)條件下的5個(gè)PHB代謝