優(yōu)良嗜酸乳桿菌的選育及其菌劑制備技術(shù)研究.pdf

1、人體微生態(tài)系統(tǒng)的平衡穩(wěn)定對(duì)人體身體健康有著非常重要的意義，是維持健康的必要因素之一；嗜酸乳桿菌在其中扮演著重要角色，對(duì)人體有強(qiáng)大的益生功能。經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的演化，不同宿主來(lái)源的嗜酸乳桿菌對(duì)宿主細(xì)胞黏附具有特異性；因此篩選一株能耐受胃腸道惡劣環(huán)境、抑菌能力強(qiáng)、黏附性能好的優(yōu)良人源性嗜酸乳桿菌，是開(kāi)發(fā)功能性食品、活菌制劑、保健藥品等產(chǎn)品的關(guān)鍵。高密度培養(yǎng)技術(shù)和真空冷凍干燥技術(shù)是乳酸菌菌劑制備的核心技術(shù)；優(yōu)化嗜酸乳桿菌的高密度培養(yǎng)工藝和真空冷凍干

2、燥技術(shù)能提高生產(chǎn)效率，保證產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)化，維持產(chǎn)品穩(wěn)定性，延長(zhǎng)貨架期。
　　本研究首先利用低pH環(huán)境和高膽鹽濃度環(huán)境從7個(gè)7-14天內(nèi)健康新生兒新鮮糞便樣品中篩選獲得8株耐酸耐膽鹽性能優(yōu)良的革蘭氏陽(yáng)性桿菌菌株。利用菌落形態(tài)、生理生化特征和分子生物學(xué)鑒定，篩選出2株嗜酸乳桿菌，分別命名為嗜酸乳桿菌LaNCU401和嗜酸乳桿菌LaNCU402。
　　針對(duì)LaNCU402進(jìn)行益生功能的研究發(fā)現(xiàn)：LaNCU402對(duì)模擬胃腸道環(huán)境的抗脅迫

3、能力強(qiáng)，人工胃腸液作用12 h后，活菌濃度仍保持在107cfu/mL以上；對(duì)Caco-2細(xì)胞系具有較好的黏附性能，黏附指數(shù)達(dá)9.52±1.40/Caco-2；抑菌方面LaNCU402對(duì)常見(jiàn)致病菌有較好的抑制作用，對(duì)益生菌的生長(zhǎng)沒(méi)有影響；LaNCU402與嗜酸乳桿菌ATCC4356有相似的抗藥性，具有一定的抗藥性能。
　　本文通過(guò)高密度培養(yǎng)技術(shù)和真空冷凍干燥技術(shù)的優(yōu)化對(duì)LaNCU402菌劑制備技術(shù)進(jìn)行研究。采用FFD、SA和CCD試

4、驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)增菌培養(yǎng)基進(jìn)行優(yōu)化，得到優(yōu)化培養(yǎng)基為：葡萄糖1.5％、蛋白胨1%、牛肉膏1.4584%、酵母粉0.4%、檸檬酸三銨0.2%、K2HPO40.2%、MgSO4?7H2O0.02%、MnSO4?4H2O0.005%、NaAc?3H2O0.5%、乳糖1.7665%、番茄汁31.6029%、吐溫800.1%；以活菌濃度為響應(yīng)值，對(duì)LaNCU402高密度培養(yǎng)條件優(yōu)化確定為：接種量4%，培養(yǎng)溫度設(shè)定為37℃培養(yǎng)22h后以33℃培養(yǎng)2h，堿流

5、加中和劑為氨水，培養(yǎng)pH為6.2；以此培養(yǎng)LaNCU402的活菌濃度可達(dá)到4.4967×109cfu/mL。對(duì)真空冷凍干燥技術(shù)優(yōu)化后，確定菌劑制備關(guān)鍵技術(shù)為：發(fā)酵液離心參數(shù)：4500rpm、15min，凍干保護(hù)劑為7%海藻糖和16%脫脂乳粉，凍干樣品厚度為4mm，以此條件真空冷凍干燥的LaNCU402菌粉的凍干存活率可達(dá)90.28%，在室溫、4℃和-20℃下貯藏3個(gè)月的相對(duì)存活率為80.15%、85.46%和89.97%。
　　綜