雞胚胎原始生殖細(xì)胞的冷凍保存和體外培養(yǎng)的研究.pdf

1、該研究采用Ficoll密度梯度離心提取發(fā)育至第19期和第28期雞胚胎性腺中的原始生殖細(xì)胞(Primordial Germ Cells,PGCs),在不同的冷凍保護(hù)液、同一種冷凍保護(hù)液的不同濃度、不同的冷凍保護(hù)程序下進(jìn)行超低溫冷凍保存,1周后復(fù)蘇,并進(jìn)行體外培養(yǎng)、分化試驗(yàn),結(jié)果如下:1.當(dāng)各種冷凍保護(hù)劑的濃度為10％時(shí),同一種冷凍保護(hù)液,冷凍程序Ⅰ和冷凍程序Ⅱ之間,PGCs的存活率存在顯著(P<0.05)或極顯著(P<0.01)差異.2.

2、當(dāng)冷凍保護(hù)劑的濃度為10％時(shí),在其他冷凍保存條件相同的情況下,分離后直接進(jìn)行冷凍保存的PGCs,復(fù)蘇后的存活率極顯著(P<0.01)高于經(jīng)體外培養(yǎng)24 h后再進(jìn)行冷凍保存的 PGCs.3.同一種冷凍保存條件下,冷凍保護(hù)液不同的濃度之間表現(xiàn)為:10％濃度與15％濃度相比較,細(xì)胞的存活率除冷凍保護(hù)液Ⅳ外,其余差異不顯著(P>0.05);20％濃度下,細(xì)胞的存活率最低,且與10％及15％濃度下的存活率相比存在顯著(P<0.05)或極顯著(P<

3、0.01)差異.4.PGCs復(fù)蘇后,當(dāng)把其培養(yǎng)在以DMEM為基礎(chǔ)液,添加10％的胎牛血清、2％的雞血清、2 mmol/L谷氨酰胺、1 mmol/L丙酮酸鈉、5.5×10<'-5>mol/L β-巰基乙醇、100U/mL硫酸慶大霉素、以雞胚成纖維細(xì)胞作飼養(yǎng)層的培養(yǎng)體系中時(shí),PGCs可貼壁,并可聚集成細(xì)胞團(tuán),但不能克隆、增殖,繼續(xù)培養(yǎng)下去,PGCs最終死亡.5.PGCs復(fù)蘇后,當(dāng)把其培養(yǎng)在添加10％的胎牛血清、2％的雞血清、2 mmol/L