轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲棉抗性鑒定及遺傳規(guī)律研究.pdf

1、該文通過花粉管導入法導入抗蟲基因(Cry1Aa)的受體材料7030轉(zhuǎn)化植株(k3、k6、k7、k19)進行了PCR檢測、生物測定、卡那霉毒檢測,鑒定出了K6、K19為轉(zhuǎn)基因抗蟲棉.我們用SDS法提取到了高質(zhì)量的DNA,進行了PCR檢測,在PCR檢測中我們確立了最佳反應體系(反應總體積為20ul,其中含10×反應緩沖液2ul,氯化鎂為2.0mmol/L、酶為0.2u,0.3mmol/LdNTPs,Primer1為0.25pg/uL,Pri

2、mer2為0.25pg/uL,模板DNA為稀釋3000×溶液).并且深入研究了PCR反應中氯化鎂對PCR反應的影響(氯化鎂的濃度受到了多方面因素的制約:在低濃度氯濃度氯化鎂的情況下,Mg<'2+>首先被EDTA等絡合劑絡合一部分,然后與模板、引物、dNTP結(jié)合一部分,剩余的Mg<'2+>與TapDNA聚合酶結(jié)合起催化活性,但是當酶濃度增加時,沒有與Mg<'2+>結(jié)合的酶也可以在引物和模板進行退火時與他們結(jié)合,但是這種結(jié)合不具有催化活性,

3、因而無活性的酶對有活性的酶產(chǎn)生了競爭作用,導致PCR產(chǎn)率降低,高濃度進非特異性擴增增加).研究了抗蟲基因?qū)胧荏w植株后,酯酶同工酶酶譜、過氧化物同工酶酶譜以及對氧化物同工酶活性均發(fā)生了較大變化.該文還用卡那霉素檢測法對轉(zhuǎn)化植株K6、K19的遺傳規(guī)律以及與中國主要的3類抗蟲棉山西94-24、中心94和R19進行了抗蟲基因等位性研究,結(jié)果表明K6、K19的抗蟲基因與R19、山西94-24、中心94抗蟲基因整合位點不同,K6、K19抗蟲基因間