轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲(chóng)棉抗性鑒定及遺傳規(guī)律研究.pdf

1、該文通過(guò)花粉管導(dǎo)入法導(dǎo)入抗蟲(chóng)基因(Cry1Aa)的受體材料7030轉(zhuǎn)化植株(k3、k6、k7、k19)進(jìn)行了PCR檢測(cè)、生物測(cè)定、卡那霉毒檢測(cè),鑒定出了K6、K19為轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉.我們用SDS法提取到了高質(zhì)量的DNA,進(jìn)行了PCR檢測(cè),在PCR檢測(cè)中我們確立了最佳反應(yīng)體系(反應(yīng)總體積為20ul,其中含10×反應(yīng)緩沖液2ul,氯化鎂為2.0mmol/L、酶為0.2u,0.3mmol/LdNTPs,Primer1為0.25pg/uL,Pri

2、mer2為0.25pg/uL,模板DNA為稀釋3000×溶液).并且深入研究了PCR反應(yīng)中氯化鎂對(duì)PCR反應(yīng)的影響(氯化鎂的濃度受到了多方面因素的制約:在低濃度氯濃度氯化鎂的情況下,Mg<'2+>首先被EDTA等絡(luò)合劑絡(luò)合一部分,然后與模板、引物、dNTP結(jié)合一部分,剩余的Mg<'2+>與TapDNA聚合酶結(jié)合起催化活性,但是當(dāng)酶濃度增加時(shí),沒(méi)有與Mg<'2+>結(jié)合的酶也可以在引物和模板進(jìn)行退火時(shí)與他們結(jié)合,但是這種結(jié)合不具有催化活性,

3、因而無(wú)活性的酶對(duì)有活性的酶產(chǎn)生了競(jìng)爭(zhēng)作用,導(dǎo)致PCR產(chǎn)率降低,高濃度進(jìn)非特異性擴(kuò)增增加).研究了抗蟲(chóng)基因?qū)胧荏w植株后,酯酶同工酶酶譜、過(guò)氧化物同工酶酶譜以及對(duì)氧化物同工酶活性均發(fā)生了較大變化.該文還用卡那霉素檢測(cè)法對(duì)轉(zhuǎn)化植株K6、K19的遺傳規(guī)律以及與中國(guó)主要的3類(lèi)抗蟲(chóng)棉山西94-24、中心94和R19進(jìn)行了抗蟲(chóng)基因等位性研究,結(jié)果表明K6、K19的抗蟲(chóng)基因與R19、山西94-24、中心94抗蟲(chóng)基因整合位點(diǎn)不同,K6、K19抗蟲(chóng)基因間