轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲(chóng)棉抗蟲(chóng)性鑒定方法研究.pdf

1、棉鈴蟲(chóng)是棉花生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中的主要害蟲(chóng)，常年受其危害造成的棉花減產(chǎn)特別嚴(yán)重。目前在棉花生產(chǎn)中，轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉得到了廣泛的推廣應(yīng)用，如轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲(chóng)棉等。由于我國(guó)轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉研究起步較晚，目前還沒(méi)有建立標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一的轉(zhuǎn)Bt基因棉抗蟲(chóng)性鑒定技術(shù)。本研究通過(guò)對(duì)國(guó)內(nèi)現(xiàn)有轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉鑒定方法的比較，對(duì)鑒定指標(biāo)的考察和抗蟲(chóng)性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)的劃分，以期為建立易于掌握、標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一的轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲(chóng)棉抗蟲(chóng)性鑒定技術(shù)提供參考。
　　 1.2007年利用卡那霉素涂抹法

2、、Npt-Ⅱ的PCR檢測(cè)法及Bt金標(biāo)免疫檢測(cè)試紙條檢測(cè)法對(duì)轉(zhuǎn)Bt基因材料的陽(yáng)性株率進(jìn)行了檢測(cè)。所檢測(cè)的8份材料中，只有綠億棉11號(hào)、中長(zhǎng)雜4138和鄂雜棉10號(hào)的陽(yáng)性株率相差較大，在10％以上。方差分析結(jié)果顯示，三種檢測(cè)方法之間的差異不顯著，不同材料之間的陽(yáng)性株率差異較大，達(dá)到極顯著水平。對(duì)三種不同方法的陽(yáng)性株率的相關(guān)性分析結(jié)果顯示，三種方法的相關(guān)系數(shù)均在0.97以上，達(dá)到極顯著水平。說(shuō)明三種檢測(cè)方法的檢測(cè)結(jié)果一致性高，而卡那霉素涂抹法

3、在這三種方法中最為簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)，可以作為轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲(chóng)棉陽(yáng)性株率的主要檢測(cè)方法。
　　 2．轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲(chóng)棉材料的陽(yáng)性株率反映了材料本身的純度高低。將2007年三種方法的檢測(cè)結(jié)果平均以后發(fā)現(xiàn)，8份材料中，除綠億棉11號(hào)和湘雜棉10號(hào)的陽(yáng)性株率較低之外，其他各材料的陽(yáng)性株率均在90％以上，是合格的轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲(chóng)棉。2008年所測(cè)的3份材料中，億K9F1的陽(yáng)性株率為98％，廣源棉980和湘雜棉10號(hào)的陽(yáng)性株率較低，不足80％。

4、　　 3．室內(nèi)生物測(cè)定法是轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉抗蟲(chóng)性的主要檢測(cè)方法。2007年檢測(cè)的8份材料中，接蟲(chóng)后5d，荊03-88和岡C04的幼蟲(chóng)校正死亡率大于90％，抗性級(jí)別為高抗，其他各參試材料的幼蟲(chóng)校正死亡率小于90％，抗性級(jí)別為抗；2008年的3份材料的幼蟲(chóng)校正死亡率均在60％至90％之間，抗性級(jí)別為抗。葉片平均受害等級(jí)的統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，接蟲(chóng)后5d，2007年各參試材料中，湘雜棉10號(hào)葉片平均受害等級(jí)在2.1～2.5之間，其他各參試材料的葉片平均

5、受害等級(jí)均在2.0以下；2008年的3份材料中，湘雜棉10號(hào)的葉片平均受害等級(jí)為3.0，億K9F1和廣源棉980的抗性級(jí)別均小于2.5。存活幼蟲(chóng)發(fā)育狀況的統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，接蟲(chóng)后5d，2007年各參試材料的存活幼蟲(chóng)基本都在分布在1齡和2齡，而感蟲(chóng)對(duì)照鄂棉24號(hào)的幼蟲(chóng)基本達(dá)到3齡，且數(shù)目遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于各參試材料的存活幼蟲(chóng)數(shù)；2008年各參試材料的幼蟲(chóng)體長(zhǎng)和體重均比鄂棉24號(hào)的小，幼蟲(chóng)體長(zhǎng)減退30％左右，幼蟲(chóng)體重減退50％～70％。以上結(jié)果表明，接蟲(chóng)

6、后5d，轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲(chóng)棉材料對(duì)棉鈴蟲(chóng)幼蟲(chóng)有明顯的抑制生長(zhǎng)和毒殺作用。
　　 4.2008年，卡那霉素涂抹法對(duì)已知轉(zhuǎn)Bt基因抗蟲(chóng)棉雜交組合的親本及F1、F2分離群體檢測(cè)結(jié)果顯示，非抗蟲(chóng)棉親本全部表現(xiàn)為陰性，轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉親本及F1全部表現(xiàn)為陽(yáng)性，F(xiàn)2群體共檢測(cè)了147株，表現(xiàn)為轉(zhuǎn)基因的陽(yáng)性株數(shù)與陰性株數(shù)的比為106：31，卡方測(cè)驗(yàn)結(jié)果顯示，分離比符合3：1，說(shuō)明Bt基因?yàn)閱慰截惒迦耄@性遺傳。室內(nèi)生物測(cè)定的各指標(biāo)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)Bt基因