29192.氟蟲氰衍生物親和柱的制備及其在gaba受體分離中的應(yīng)用

1、上海師范大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要論文題目：氟蟲氰衍生物親和柱的制備及其在GABA受體分離中的應(yīng)用學(xué)科專業(yè)：高分子化學(xué)與物理學(xué)位申請人：于廣金指導(dǎo)教師：任天瑞摘要Y氨基丁酸(aminobutyricacid，GABA)受體是多種殺蟲劑的重要作用靶標(biāo)。因此，從生物體中分離純化GABA受體，并對其立體結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究，為開發(fā)高效、低毒、安全農(nóng)藥以及克服害蟲的抗藥性等方面具有極大的指導(dǎo)意義。本文以鳙魚為研究材料，探究GABA受體的親和柱分離方法。通過文

2、獻(xiàn)調(diào)研，總結(jié)GABA受體分離純化的方法，利用計算化學(xué)的方法，從相關(guān)文獻(xiàn)報道的小分子中，確定親和層析使用的配體為氟蟲氰衍生物。經(jīng)過基質(zhì)的活化、偶聯(lián)和封閉等過程制備出親和層析的介質(zhì)，并研究了親和層析柱的應(yīng)用條件，最終確定其最佳使用條件?；|(zhì)的活化：選擇SepharoseCL6B作為親和層析柱的基質(zhì)，l，4丁二醇二縮水甘油醚作為活化劑，將其接連接于基質(zhì)上?；罨骃epharoseCL6B上含有的環(huán)氧基密度為6426tmol／g膠。研究活化溫度

3、、時間及pH值等條件對活化效率的影響。最終確定1，4丁二醇而縮水甘油醚活化SepharoseCL6B的最佳實驗條件為：100gSepharoseCL6B、100mLO3mol／L的NaOH溶液和20mgNaBH4混合，再加入100mL14丁二醇二縮水甘油醚和100mLDMSO，37℃條件下170rpm振蕩反應(yīng)8h。偶聯(lián)與封閉：活化后的SepharoseCL6B上環(huán)氧基與氟蟲氰衍生物末端的伯氨基反應(yīng)，將氟蟲氰衍生物固定在Sepharose

4、CL6B上，然后用1mol／L乙醇胺溶液封閉殘余的環(huán)氧基，最終氟蟲氰衍生物的偶聯(lián)度為5868gmol／g膠。親和層析柱分離：將制備好的親和層析介質(zhì)氟蟲氰衍生物SepharoseCL6B裝柱，對鳙魚腦組織內(nèi)的GABA受體進(jìn)行分離純化。通過親和層析和離子交換層析，所得目的蛋白質(zhì)的濃度為46tg／mL，總質(zhì)量為138gg。凝膠電泳之后得到分子量分別為44kD和55kD的兩個條帶，與文獻(xiàn)上報道的其他生物對應(yīng)亞基的分子量相近，分析所得條帶可能為鳙

5、魚GABA受體的0【和B亞基。本文的創(chuàng)新點在于首次利用氟蟲氰衍生物作為配體，制備親和層柱，從鳙腦上海師范大學(xué)碩士學(xué)位論文Abstract7Aminobutyricacid(GABA)receptoristheconcernedtargetformanyinsecticidesThestructureofGABAreceptoriscloselyrelatedtotheinsecticideresistanceandtoxicologyT

6、herefore，isolation／purificationofGABAreceptorsandfurtherstudyonthespatialstructurewillshedlightonthedevelopmentoflligh—efficient10wtoxicandsafeinsecticideaswellasovercomingthepesticideresistanceThispaperpresentsathorough

7、studyofaffmityseparationmethodforpurifyingbigheadGABAreceptorThispaperoutlinedthereportedGABAreceptorisolation／purificationmethods，andthendeterminedtheligandofaffinitychromatographytobefipronilderivatives，basingonthecomp

8、utationalanalysisresultoftheorganicmoleculesinhibitedtoGABAreceptorintheliteratureTheaffinitychromatographymediawaspreparedthroughmatrixactivation，couplingandclosureprocess，atthesametime，theapplicationconditionsofaffinit

9、ychromatographywasdeterminedMatrixactivation：SelectSepharoseCL一6Basaffinitychromatographymatrix，1，4butanedioldiglycidyletherasactivatoranddirectlyconnectedonSepharoseCL6BThedensityofepoxygroupscontainedinactivatedSepharo

10、seCL6BWas6426Itmol／ggelTheinfluenceofactivationtemperature，time，pHandotherconditionsontheefficiencyofactivationwasalsostudiedTheoptimalactiveconditionsofSepharoseCL6Bwith1，4butanedioldiglycidyletherasfollowing：themixture

11、of50gSepharoseCL一6B，50ml03mol／Lsodiumborohydride，10mgNaBH4，and5ml14butanedioldiglycidylether，at37。C，stirringat170rpmfor8hCouplingandclosing：TheimmobilizationofFipronilderivativesonactivatedSepharoseCL6Bwasrealizedthrough

12、thereactionoftheterminalprimaryamineofFipronilderivativeswiththeepoxygroupofactivatedSepharoseCL6B，andthentheresidualepoxygroupwasclosed、析m1mol／LethanolamineThecoulpingdegreeofFipronilderivativesonSepharoseCL6Breached586