幾種不同基質(zhì)硼酸親和整體柱的制備及其在糖蛋白分離富集中的應(yīng)用.pdf

1、本工作的主要內(nèi)容是幾種有機(jī)聚合物基質(zhì)及有機(jī)-無機(jī)雜化基質(zhì)硼酸親和整體柱的制備，及其在糖蛋白的分離和富集中的應(yīng)用。論文內(nèi)容包括如下五部分:
　　第一部分:緒論。綜述了硼酸親和技術(shù)以及整體柱技術(shù)的發(fā)展情況及其面臨的挑戰(zhàn);對(duì)結(jié)合兩者優(yōu)勢(shì)的硼酸親和整體柱的發(fā)展現(xiàn)狀和制備技術(shù)進(jìn)行了綜述。此外，還對(duì)本論文的研究意義、研究?jī)?nèi)容以及課題的創(chuàng)新性進(jìn)行了簡(jiǎn)要的介紹。
　　第二部分:以金屬有機(jī)凝膠為致孔模板的大孔型硼酸親和整體柱的制備及其應(yīng)用。以

2、金屬有機(jī)凝膠(MOGs)作為新穎的致孔模板，3-丙烯酰胺基苯硼酸（AAPBA）作為硼酸配基，乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)作為交聯(lián)劑，在不銹鋼柱內(nèi)原位聚合制備了大孔型有機(jī)基質(zhì)的poly(AAPBA-co-EDMA)親和整體柱。以MOGs致大孔的新穎方法比傳統(tǒng)的致孔方法更加簡(jiǎn)易方便。通過系統(tǒng)地優(yōu)化反應(yīng)條件，包括單體比例、反應(yīng)溫度、MOGs用量，制備得到具有通透大孔結(jié)構(gòu)的整體柱骨架，并結(jié)合掃描電鏡、傅立葉紅外光譜、壓汞儀等表征手段對(duì)整體柱

3、的形貌、孔徑和性能進(jìn)行評(píng)價(jià)。將poly(AAPBA-co-EDMA)親和整體柱應(yīng)用于對(duì)糖蛋白的分離和富集，考察糖蛋白辣根過氧化物酶（HRP）和轉(zhuǎn)鐵蛋白(TF)在整體柱上的色譜保留行為，結(jié)果表明該大孔型有機(jī)硼酸親和整體柱對(duì)糖蛋白表現(xiàn)出良好的親和性能和動(dòng)態(tài)吸附容量。并將其成功地應(yīng)用于加標(biāo)牛血清樣品中糖蛋白TF的分離和富集。
　　第三部分:采用“One-Pot”法合成有機(jī)-無機(jī)雜化硼酸親和整體柱并將其用于中性條件下分離富集糖蛋白。本工作

4、四甲氧基硅烷(TMOS)和乙烯基三甲氧基硅烷(VTMS)作為硅烷前驅(qū)體，3-丙烯酰胺基苯硼酸(AAPBA)作為有機(jī)單體，采用“One-Pot”法制備一種新型的有機(jī)-無機(jī)雜化基質(zhì)的硼酸親和整體柱，制備過程簡(jiǎn)單。對(duì)AAPBA-硅膠雜化硼酸親和整體柱的制備條件進(jìn)行系統(tǒng)的優(yōu)化，可以得到大孔均勻分布、通透性能良好的整體柱骨架結(jié)構(gòu)。實(shí)驗(yàn)中對(duì)該硼酸親和整體柱的骨架形貌、滲透性、動(dòng)態(tài)吸附容量和親和色譜保留行為等進(jìn)行表征和評(píng)價(jià)。由于硅膠基質(zhì)的引入，AAP

5、BA-硅膠雜化硼酸親和整體柱表現(xiàn)出良好的親水性能，無需在流動(dòng)相中加入有機(jī)溶劑，這樣的色譜分析條件有利于生物分子的分析。另外硼酸配基AAPBA中羰基氧原子與硼原子之間的配位作用使其在中性條件下即可與順式二醇作用，因此該硼酸親和整體柱在中性條件下即對(duì)含有順式二醇的生物小分子和糖蛋白表現(xiàn)出良好的特異性親和作用，并被成功的應(yīng)用于實(shí)際樣品的分析中。
　　第四部分:基于Click Chemistry修飾的新型有機(jī)-無機(jī)雜化硼酸親和整體柱的制備

6、及其在糖蛋白分離中的應(yīng)用。本工作發(fā)展了一種新穎的制備有機(jī)-無機(jī)雜化硼酸親和整體柱的方法。首先通過“Single-Step”法合成帶有疊氮活性基團(tuán)的雜化整體柱骨架，隨后利用疊氮雜化整體柱與炔基硼酸配基之間的銅(Ⅰ)催化疊氮-炔環(huán)加成反應(yīng)(CuAAC)制備“Clicked”有機(jī)-無機(jī)雜化硼酸親和整體柱。結(jié)合元素分析、紅外光譜、掃描電鏡等多種常規(guī)手段對(duì)制備的雜化硼酸親和整體柱進(jìn)行系統(tǒng)的表征和評(píng)價(jià)?！癈licked”有機(jī)-無機(jī)雜化硼酸親和整體柱

7、在中性條件下對(duì)核苷和糖蛋白表現(xiàn)出良好的親和性能，pH7.0時(shí)糖蛋白卵清白蛋白的動(dòng)態(tài)吸附容量為2.36 mg·g-1。該整體柱被成功地應(yīng)用于從實(shí)際樣品蛋清中分離富集卵清白蛋白和卵轉(zhuǎn)鐵蛋白，具有實(shí)用性。
　　第五部分:基于thiol-ene點(diǎn)擊化學(xué)修飾的有機(jī)-無機(jī)雜化硼酸親和整體柱的制備及應(yīng)用。本工作首先采用溶膠-凝膠法，以四甲氧基硅烷硅烷(TMOS)和巰丙基三甲氧基硅烷(MPTMS)作為反應(yīng)前驅(qū)體制備巰基硅膠整體柱。然后利用巰基-烯

8、之間的點(diǎn)擊反應(yīng)在整體柱上修飾硼酸配基3-丙烯酰胺基苯硼酸（AAPBA），制成AAPBA-硅膠雜化親和整體柱。制備過程簡(jiǎn)單、安全。優(yōu)化了硼酸親和整體柱的制備條件，并以掃描電鏡、紅外光譜等多種手段對(duì)整體柱形貌和機(jī)械性能進(jìn)行表征。AAPBA-硅膠雜化親和整體柱在中性條件下對(duì)含有順式二醇的生物小分子表現(xiàn)出良好的特異性親和能力，并被成功地應(yīng)用于對(duì)糖蛋白的分離分析。點(diǎn)擊化學(xué)的修飾方法新穎、可靠，可以用于制備多種不同類型的硼酸親和整體柱，具有較大的應(yīng)