30214.利用人工設計反式作用小rna進行細菌基因沉默的研究

1、中國海洋大學博士學位論文利用人工設計反式作用小RNA進行細菌基因沉默的研究姓名：程汝濱申請學位級別：博士專業(yè)：藥物化學指導教師：于文功20090601突變體實驗結果證明，atsRNA的二級結構(如靶基因配對結合區(qū)域的莖環(huán)結構、配對區(qū)域內loop環(huán)內堿基個數(shù)等)和穩(wěn)定性對atsRNA的干擾活性至關重要；(二)在構成atsRNA的三個模塊結構中，靶基因配對結合區(qū)域和Hfq結合位點是atsRNA發(fā)揮基因沉默作用所必須的，且Hfq結合位點對于a

2、tsRNA在體內的穩(wěn)定性非常重要。(三)利用hfq缺失菌株，我們發(fā)現(xiàn)atsRNA介導的基因沉默是Hfq依賴型的，且Hfq能夠與atsRNA直接結合而增加其穩(wěn)定性。(四)atsRNA能夠直接抑制靶基因的翻譯和降解靶mRNA，atsRNA介導的靶mRNA的降解是RNaseE依賴型的；并且在atsRNA介導的基因沉默中，atsRNA對靶基因翻譯的阻斷作用起主導作用，而靶mRNA的降解不是atsRNA引起靶基因沉默所必須的。(五)為了進一步證明

3、atsRNA能夠作為一種細菌基因功能研究的工具，我們針對細菌體內的必須基因murA，trmA和耀徊設計合成了一系列的atsRNA，定量PCR的結果表明atsRNA明顯的降低了靶基因的mRNA表達水平，且atsRNA的表達能夠有效地抑制宿主細胞的生長速度，說明atsRNA的表達有效的降低了靶基因的表達。綜上所述，本論文首次利用人工設計的反式作用小RNA成功地對細菌的靶基因進行了高效和特異性的沉默，從而建立了一種高效、簡便的細菌功能基因的研

4、究技術。隨著細菌內源性小RNA的研究進展，人們發(fā)現(xiàn)小RNA在細菌的致病力和環(huán)境適應力方面發(fā)揮了重要的調節(jié)作用。針對細菌的致病基因或致病基因的調控基因設計相應的atsRNA，將有可能阻斷或抑制細菌的致病力，達到抗感染的目的。因此，atsRNA基因沉默技術的建立不但具有重要的理論意義，而且具有廣泛的應用前景，將為細菌感染的治療提供了一種嶄新的途徑，同時為解決日益加劇的細菌耐藥難題創(chuàng)造條件。關鍵詞：人工設計反式作用小RNA；基因沉默；細菌；非