熱休克法抑制第一次卵裂實(shí)現(xiàn)草魚雌核發(fā)育的細(xì)胞學(xué)觀察.pdf

1、該文用組織切片方法系統(tǒng)地觀察了用被紫外線照射的湘江野鯉(Cyprinus carpio xiang jiang)的精子作激活源啟動(dòng)草魚(Ctenopharyngodon idellus)卵子雌核發(fā)育的細(xì)胞學(xué)變化過程.確定了在一定孵化溫度下,被激活的草魚卵子完成第一次染色體復(fù)制的準(zhǔn)確時(shí)間,實(shí)施人工染色體加倍處理的最佳時(shí)機(jī),人工加倍處理的最佳方法和處理強(qiáng)度等.為通過抑制第一次卵裂,得到高比例基因純合型雌核發(fā)育草魚提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù).并得到了在遺

2、傳育種理論研究和生產(chǎn)應(yīng)用上均有重要價(jià)值的基因純合型的雌核發(fā)育草魚.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:在24℃孵化水溫下,草魚卵在被激活后21min處于第一次卵裂的S期;24min進(jìn)入第一次卵裂前期;27-30min處于中期;33min進(jìn)入后期;36min處于末期.由此可知被激活的草魚卵子在第27min時(shí)已經(jīng)完成染色體的復(fù)制,使草魚卵子雌核染色體人工加倍的最佳時(shí)期是在被激活后的27-30min這一時(shí)間區(qū)段內(nèi).用不同的溫度處理完成了染色體復(fù)制的被激活卵,以確定

3、抑制被激活卵的第一次卵裂的最適休克溫度.切片分析的結(jié)果表明在39℃以下的水溫處理2min的被激活卵,有絲分裂器完全不被破壞,說明39℃以下水溫對(duì)草魚卵的熱休克處理是無效的.在40℃水溫處理2min的被激活卵,有絲分裂器部分被破壞,但這種破壞是不完全的.在41℃、42℃水溫處理2min的被激活卵,有絲分裂器完全被破壞.但在42℃處理的胚胎死亡率很高.所以在41℃處理是使染色體組加倍的最佳熱休克溫度.而在41℃處理2min是比較合適的熱休克

4、強(qiáng)度.觀察解除熱休克后被處理卵子紡錘體恢復(fù)情況,發(fā)現(xiàn)有72.8﹪的激活卵在解除休克后6min內(nèi)恢復(fù)有絲分裂器,27.2﹪的卵子內(nèi)未出現(xiàn)紡錘絲和紡錘體.未恢復(fù)紡錘體的激活卵在解除休克后6min,卵內(nèi)染色體開始核化,9min時(shí)形成新的二倍體細(xì)胞核,14min時(shí)處入再次分裂的前期,19min時(shí)進(jìn)入分裂中期,24min進(jìn)入分裂后期,29min時(shí)處于分裂末期,且可以看到子核的形成.此外,對(duì)雌核發(fā)育草魚細(xì)胞遺傳學(xué)分析證實(shí)所得雌核發(fā)育草魚的染色體數(shù)目