神經(jīng)肽S對番鴨血清及免疫器官中細胞因子的影響.pdf

1、神經(jīng)肽S（Neuropeptide S,NPS）是Sato S等人發(fā)現(xiàn)的一種由20個氨基酸構(gòu)成的新的神經(jīng)肽。據(jù)研究報道，已知物種的NPS的N-末端氨基酸殘基都為絲氨酸(serine, S)，所以將它命名為神經(jīng)肽S。NPS的功能主要是通過結(jié)合它的受體(NPSR)發(fā)揮作用，這兩者構(gòu)成了一種新的系統(tǒng)（NPS-NPSR系統(tǒng)）。NPS和NPSR廣泛存在于動物體內(nèi)，并參與調(diào)節(jié)機體的多種重要的生理功能，如：喚醒、應(yīng)激、飲食、學(xué)習(xí)記憶以及免疫調(diào)節(jié)功能等

2、。但是，這些研究僅在人、豬、兔和鼠等動物中有過報道，而關(guān)于NPS對禽類的免疫功能的作用，目前還沒有人做過研究。因此，本實驗以番鴨為研究對象，采用基因克隆、病理切片、熒光量RT-PCR和ELISA等方法，獲得番鴨NPS的基因序列，分析了肌肉注射NPS對健康組和感染H9N2病毒組的番鴨免疫器官和細胞因子的影響，為進一步探討番鴨的免疫調(diào)節(jié)作用和開發(fā)其作為免疫增強劑提供了一定的理論依據(jù)。
　　(目的)番鴨神經(jīng)肽S（NPS）基因的克隆，并初

3、步探討NPS對健康組和感染H9N2番鴨的血清及免疫器官中細胞因子的影響。（方法）在本文中，利用基因克隆技術(shù)克隆番鴨NPS的基因，將番鴨（175只）分為五組，對照組A、NPS對照組B、攻毒組C、攻毒后注射NPS組D以及注射NPS后攻毒組E。飼養(yǎng)28天，觀察注射病毒及NPS后番鴨的大體病變。隨后采血、收集血清、檢測血清細胞因子（IL-β、IL-4、IL-6、IL-10、NTF-α）分泌的變化；剖檢番鴨，采集其免疫器官(胸腺、脾、法氏囊)，用

4、10％福爾馬林固定，石蠟包埋，切片，HE染色，觀察組織學(xué)病變。采用Real-time qPCR檢測細胞因子（IL-2、IL-6、IL-10）在免疫器官中的表達情況，研究了NPS對感染H9N2番鴨免疫器官的免疫功能的影響。實驗結(jié)果表明：
　　（1）得到番鴨NPS cDNA克隆序列為181 bp,用DNAstar軟件分析，不同物種之間的NPS基因是高度同源的，其中番鴨NPS和雞NPS的親緣性最高，只有在N末端的最后一個氨基酸出現(xiàn)差異。

5、
　?。?）剖檢攻毒組的番鴨,可看到大部分卵黃囊腫大，氣管粘膜充血水腫，肝臟輕微腫大，鴨子胸腺較正常的大,并有彌散性出血點。鏡下可觀察到注射病毒的番鴨的脾、法氏囊呈不同程度的病變。
　　（3）不同條件下注射NPS可能對番鴨血清和免疫器官的細胞因子的分泌產(chǎn)生影響。對血清細胞因子的分泌情況研究中，發(fā)現(xiàn)注射NPS后再注射病毒組E的效果最佳；在免疫器官中，NPS對照組D的細胞因子的表達量最高，但注射NPS后再注射病毒的效果要優(yōu)于注射