神經(jīng)肽Cortistatin在移植免疫中作用的研究.pdf

1、獲得移植免疫耐受是器官移植治療的終極目標(biāo)。CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)T細(xì)胞對獲得并維持對自身抗原或同種異體移植抗原的免疫耐受至關(guān)重要。增強(qiáng)CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)T細(xì)胞的功能可防止自身免疫性疾病及移植排斥反應(yīng)的發(fā)生。轉(zhuǎn)錄因子Foxp3主要表達(dá)在CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)T細(xì)胞,作為CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)T細(xì)胞的分子標(biāo)志,可對其發(fā)育及功能進(jìn)行調(diào)控。FK506及環(huán)孢素A等傳統(tǒng)免疫抑制藥物雖然可以有效抑制同種異體免疫反應(yīng),但長期使用此類

2、藥物可能導(dǎo)致嚴(yán)重的副作用,包括抑制調(diào)節(jié)T細(xì)胞的產(chǎn)生及其功能。
　　因此,有必要探索、研發(fā)副作用較少的免疫抑制藥物。近期已經(jīng)有應(yīng)用神經(jīng)肽在自身免疫性疾病及骨髓移植中誘導(dǎo)免疫耐受的研究報(bào)道。CST是一種生長抑素相關(guān)的環(huán)形神經(jīng)肽。作為一種生長抑素類似物,CST可以與所有5種SSTR結(jié)合,且其受體親和力與SS相當(dāng)。CST不但可以與SSTR結(jié)合,還可以與MrgX2及GHSR結(jié)合。人類的各種免疫細(xì)胞表達(dá)CST,而沒有SS的表達(dá),且其表達(dá)水平與

3、免疫細(xì)胞的分化與激活狀態(tài)有關(guān)。因此CST可能是一種免疫系統(tǒng)重要的內(nèi)源調(diào)節(jié)因子。CST可抑制一些自身免疫性疾病,如:IBD、CIA的發(fā)生與發(fā)展。
　　自身免疫性疾病及免疫排斥反應(yīng)的發(fā)病機(jī)制有相似的分子及細(xì)胞基礎(chǔ),但目前還缺少關(guān)于CST對移植免疫影響的研究。因此我們用同種異體皮膚移植模型來研究CST對移植免疫的影響。我們同時(shí)比較了CST與生長抑素類似物奧曲肽對移植免疫影響的差異。
　　目的:
　　CST具有抗炎功能,對一些

4、動(dòng)物模型的自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展具有抑制作用。因缺少CST對移植免疫影響的相關(guān)研究,我們在此實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用皮膚移植模型及混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)檢測CST對同種異體移植免疫的影響并對其機(jī)制進(jìn)行探討。
　　方法:
　　皮膚移植模型中由C57BL/6(B6)(H-2K~b)小鼠供皮,移植給BALB/c(H-2K~d)受體小鼠。移植后即予CST或奧曲肽(SMS)腹腔注射,并連續(xù)注射7天。劑量分為0.02mg/kg,0.2mg/kg,2mg/

5、kg三組。以腹腔注射PBS組為對照。皮膚移植物的存活時(shí)間被記錄。應(yīng)用混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)檢測CST與奧曲肽對T細(xì)胞增殖的影響,同時(shí)應(yīng)用酶聯(lián)免疫分析(ELISA)檢測其對T細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測CST與奧曲肽對T細(xì)胞膜表面分子CD4及CD25表達(dá)的影響,同時(shí)應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測其對T細(xì)胞Foxp3基因表達(dá)的影響,以判定其對同種異體移植免疫中CD4~+CD25~+調(diào)節(jié)T細(xì)胞生成的影響。
　　結(jié)果:
　　連續(xù)7

6、日腹腔注射CST,0.2mg/kg或2mg/kg,可有效延長BALB/c受體皮片移植物存活時(shí)間,中位生存時(shí)間可分別達(dá)13天及14天,而0.02mg/kg組及對照組中位生存時(shí)間儀為7天,組間差別有顯著意義;腹腔注射奧曲肽,三種劑量組對免疫排斥反應(yīng)均無顯著保護(hù)作用,中位生存時(shí)間分別為7天、8天、8天,與對照組組間差別無顯著意義。CST與奧曲肽均可以抑制混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)中T細(xì)胞的增殖反應(yīng),同時(shí)可降低細(xì)胞培養(yǎng)上清中IFN-γ的濃度,而增加IL-

7、10的濃度,與應(yīng)用PBS的對照組相比,差別有顯著意義。與奧曲肽相比,CST對混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)中T細(xì)胞的增殖具有更強(qiáng)的抑制作用,同時(shí)可更顯著誘導(dǎo)IL-10濃度升高。流式細(xì)胞檢測顯示應(yīng)用CST治療(0.2mg/kg或2mg/kg),可使移植受體脾細(xì)胞中CD4~+ CD25~+T在CD4~+ T中所占比例增至對照組兩倍多,分別達(dá)到6.7％及5.4％,與對照組(2.5％)差別有顯著意義;應(yīng)用奧曲肽治療可使移植受體脾細(xì)胞中CD4~+CD25~+T

8、在CD4~+T中所占比例略有下降,與對照組相比差別無顯著意義。RT-PCR檢測顯示應(yīng)用CST治療(0.2mg/kg或2mg/kg),可使移植受體T細(xì)胞Foxp3基因表達(dá)水平顯著升高,而應(yīng)用奧曲肽治療治療,可使移植受體T細(xì)胞Foxp3基因表達(dá)水平輕度下降。
　　結(jié)論:
　　我們的研究顯示,作為內(nèi)源性免疫調(diào)節(jié)因子,CST可抑制T細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)產(chǎn)生抑制性細(xì)胞因子IL-10;在移植免疫中應(yīng)用CST治療可誘導(dǎo)移植免疫低反應(yīng),有效延長移