神經肽Cortistatin在移植免疫中作用的研究.pdf

1、獲得移植免疫耐受是器官移植治療的終極目標。CD4~+CD25~+調節(jié)T細胞對獲得并維持對自身抗原或同種異體移植抗原的免疫耐受至關重要。增強CD4~+CD25~+調節(jié)T細胞的功能可防止自身免疫性疾病及移植排斥反應的發(fā)生。轉錄因子Foxp3主要表達在CD4~+CD25~+調節(jié)T細胞,作為CD4~+CD25~+調節(jié)T細胞的分子標志,可對其發(fā)育及功能進行調控。FK506及環(huán)孢素A等傳統(tǒng)免疫抑制藥物雖然可以有效抑制同種異體免疫反應,但長期使用此類

2、藥物可能導致嚴重的副作用,包括抑制調節(jié)T細胞的產生及其功能。
　　因此,有必要探索、研發(fā)副作用較少的免疫抑制藥物。近期已經有應用神經肽在自身免疫性疾病及骨髓移植中誘導免疫耐受的研究報道。CST是一種生長抑素相關的環(huán)形神經肽。作為一種生長抑素類似物,CST可以與所有5種SSTR結合,且其受體親和力與SS相當。CST不但可以與SSTR結合,還可以與MrgX2及GHSR結合。人類的各種免疫細胞表達CST,而沒有SS的表達,且其表達水平與

3、免疫細胞的分化與激活狀態(tài)有關。因此CST可能是一種免疫系統(tǒng)重要的內源調節(jié)因子。CST可抑制一些自身免疫性疾病,如:IBD、CIA的發(fā)生與發(fā)展。
　　自身免疫性疾病及免疫排斥反應的發(fā)病機制有相似的分子及細胞基礎,但目前還缺少關于CST對移植免疫影響的研究。因此我們用同種異體皮膚移植模型來研究CST對移植免疫的影響。我們同時比較了CST與生長抑素類似物奧曲肽對移植免疫影響的差異。
　　目的:
　　CST具有抗炎功能,對一些

4、動物模型的自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展具有抑制作用。因缺少CST對移植免疫影響的相關研究,我們在此實驗中應用皮膚移植模型及混合淋巴細胞培養(yǎng)檢測CST對同種異體移植免疫的影響并對其機制進行探討。
　　方法:
　　皮膚移植模型中由C57BL/6(B6)(H-2K~b)小鼠供皮,移植給BALB/c(H-2K~d)受體小鼠。移植后即予CST或奧曲肽(SMS)腹腔注射,并連續(xù)注射7天。劑量分為0.02mg/kg,0.2mg/kg,2mg/

5、kg三組。以腹腔注射PBS組為對照。皮膚移植物的存活時間被記錄。應用混合淋巴細胞培養(yǎng)檢測CST與奧曲肽對T細胞增殖的影響,同時應用酶聯(lián)免疫分析(ELISA)檢測其對T細胞分泌細胞因子的影響。應用流式細胞術檢測CST與奧曲肽對T細胞膜表面分子CD4及CD25表達的影響,同時應用RT-PCR技術檢測其對T細胞Foxp3基因表達的影響,以判定其對同種異體移植免疫中CD4~+CD25~+調節(jié)T細胞生成的影響。
　　結果:
　　連續(xù)7

6、日腹腔注射CST,0.2mg/kg或2mg/kg,可有效延長BALB/c受體皮片移植物存活時間,中位生存時間可分別達13天及14天,而0.02mg/kg組及對照組中位生存時間儀為7天,組間差別有顯著意義;腹腔注射奧曲肽,三種劑量組對免疫排斥反應均無顯著保護作用,中位生存時間分別為7天、8天、8天,與對照組組間差別無顯著意義。CST與奧曲肽均可以抑制混合淋巴細胞培養(yǎng)中T細胞的增殖反應,同時可降低細胞培養(yǎng)上清中IFN-γ的濃度,而增加IL-

7、10的濃度,與應用PBS的對照組相比,差別有顯著意義。與奧曲肽相比,CST對混合淋巴細胞培養(yǎng)中T細胞的增殖具有更強的抑制作用,同時可更顯著誘導IL-10濃度升高。流式細胞檢測顯示應用CST治療(0.2mg/kg或2mg/kg),可使移植受體脾細胞中CD4~+ CD25~+T在CD4~+ T中所占比例增至對照組兩倍多,分別達到6.7％及5.4％,與對照組(2.5％)差別有顯著意義;應用奧曲肽治療可使移植受體脾細胞中CD4~+CD25~+T

8、在CD4~+T中所占比例略有下降,與對照組相比差別無顯著意義。RT-PCR檢測顯示應用CST治療(0.2mg/kg或2mg/kg),可使移植受體T細胞Foxp3基因表達水平顯著升高,而應用奧曲肽治療治療,可使移植受體T細胞Foxp3基因表達水平輕度下降。
　　結論:
　　我們的研究顯示,作為內源性免疫調節(jié)因子,CST可抑制T細胞增殖,誘導產生抑制性細胞因子IL-10;在移植免疫中應用CST治療可誘導移植免疫低反應,有效延長移