PCV2感染對仔豬免疫機(jī)能的影響及細(xì)胞因子的變化.pdf

1、PCV2與宿主免疫應(yīng)答之間的相互作用是導(dǎo)致PMWS發(fā)生的關(guān)鍵，PCV2主要侵害宿主的免疫系統(tǒng)，導(dǎo)致宿主出現(xiàn)獲得性的免疫缺陷，而且宿主在PCV2感染的不同階段表現(xiàn)出不同的應(yīng)答反應(yīng)。本試驗(yàn)分別從體外和體內(nèi)兩方面研究PCV2對仔豬免疫應(yīng)答的動(dòng)態(tài)影響，探討PCV2引起仔豬免疫抑制及其細(xì)胞與分子機(jī)制。
　　 體外試驗(yàn)：選取5頭35日齡PCV2和PRRSV血清抗體陰性的普通斷奶仔豬，前腔靜脈無菌采血后分離外周血淋巴細(xì)胞，分對照組、PHA組、

2、LPS組、PCV2組、(PCV2+PHA)組、(PCV2+LPS)組，用MTT法檢測PCV2對仔豬外周血淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響。無菌取脾臟制成單細(xì)胞懸液后，分單獨(dú)淋巴細(xì)胞(D)、淋巴細(xì)胞+PCV2(D+V)、淋巴細(xì)胞與巨噬細(xì)胞混合(H)和淋巴細(xì)胞與巨噬細(xì)胞+PCV2(H+V)4組進(jìn)行體外培養(yǎng)。分別在培養(yǎng)后0、6、12和24h收獲淋巴細(xì)胞及其培養(yǎng)上清。用ELISA的方法檢測培養(yǎng)上清液中IL-6和IL-10的含量，用RT-PCR的方法檢測淋巴

3、細(xì)胞中IL-6、IL-10及其受體mRNA的表達(dá)。結(jié)果顯示，PCV2能極顯著抑制外周血T、B淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率，促進(jìn)IL-6和IL-10的表達(dá)；而巨噬細(xì)胞能抑制PCV2對淋巴細(xì)胞IL-6及其受體表達(dá)的上調(diào)作用，同時(shí)協(xié)同PCV2促進(jìn)淋巴細(xì)胞IL-10及其受體持續(xù)地高表達(dá)，導(dǎo)致持續(xù)的免疫抑制，且巨噬細(xì)胞在PCV2的致病過程中扮演重要角色。
　　 體內(nèi)試驗(yàn)：選取19頭35日齡PCV2和PRRSV血清抗體陰性的普通斷奶仔豬，隨機(jī)分為對照組

4、（4頭）和試驗(yàn)組(15頭)，試驗(yàn)組每頭仔豬接種PCV2病毒懸液并用KLH刺激，分別在攻毒后0、3、7、10、14、21、28和35d分離仔豬外周血淋巴細(xì)胞和血清，并在攻毒后0、14、21和35d撲殺采集胸腺。用MTT法檢測外周血淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率，用ELISA法檢測血清中IL-1β、IL-2、IL-6和IL-10的表達(dá)變化，用硝酸還原酶法檢測血清和胸腺中NO的含量，用比色法檢測血清和胸腺中TNOS和iNOS的活性，用熒光定量PCR的方法檢

5、測胸腺中相關(guān)基因的表達(dá)變化。結(jié)果顯示，PCV2能顯著降低外周血T、B淋巴細(xì)胞的增殖能力；與對照豬相比，攻毒豬血清中IL-6的含量無顯著變化（P＞0.05），IL-iβ的含量在攻毒后7d極顯著升高(P＜0.05），IL-10的含量在攻毒后35d極顯著升高(P＜0.01），IL-2的含量在攻毒后10d顯著降低(P＜0.05），在攻毒后21d顯著升高(P＜0.05），在攻毒后28和35d極顯著升高(P＜0.01）；攻毒豬血清和胸腺中NO的含量

6、均在攻毒后14d顯著升高(P＜0.05），然后緩慢下降；血清和胸腺中NOS(包括TNOS和iNOS)的變化趨勢比較一致，且iNOS均是顯著升高后再逐漸降低，但始終高于對照豬；攻毒豬胸腺中IL-2mRNA和IL-6mRNA的表達(dá)水平在攻毒后各時(shí)間點(diǎn)均低于對照組，尤其在攻毒后21和35d均顯著降低(P＜0.05);IL-10mRNA的表達(dá)在攻毒后14d極顯著升高(P＜0.01)，IL-6和IL-10與各自受體在攻毒后的表達(dá)變化呈明顯的反向關(guān)