Toll途徑中進(jìn)化保守信號介導(dǎo)因子(ECSIT)在對蝦抗菌免疫中的功能研究.pdf

1、近年來，對蝦養(yǎng)殖的規(guī)模迅速增加，但對蝦的病害流行卻愈加嚴(yán)重。在過去十年中，由病毒和細(xì)菌所引起的蝦病給對蝦養(yǎng)殖業(yè)造成非常嚴(yán)重的損失。深入研究對蝦免疫系統(tǒng)可以為對蝦抗病機(jī)制和治療方式提供理論依據(jù)。Toll信號途徑在動物先天免疫過程中發(fā)揮著很重要的作用，研究對蝦Toll信號途徑在先天免疫過程中發(fā)揮的作用有助于我們更全面的了解對蝦的先天免疫分子機(jī)制，并且可以使我們對無脊椎動物Toll信號途徑有更進(jìn)一步的認(rèn)識。
　　ECSIT（Toll途徑

2、進(jìn)化保守信號介導(dǎo)因子）在哺乳動物Toll途徑和骨形成途徑（BMP途徑）中作為信號介導(dǎo)因子，可以激活下游的激酶，促使核轉(zhuǎn)錄因子入核。此外，在哺乳動物巨噬細(xì)胞線粒體內(nèi)ECSIT定位于線粒體內(nèi)膜上，當(dāng)受到病原刺激時，胞膜上的Toll樣受體激活位于胞內(nèi)的TRAF6（腫瘤壞死因子受體結(jié)合因子6）并轉(zhuǎn)位到線粒體上，通過與線粒體中的ECSIT蛋白相互作用，促進(jìn)胞質(zhì)內(nèi)和線粒體中活性氧的產(chǎn)生，殺死細(xì)菌。然而ECSIT在甲殼類動物中的具體功能還沒有相關(guān)報道

3、。本文以日本囊對蝦（Marsupenaeusjaponicus）為研究材料，研究了日本囊對蝦Ecsit基因（MjEcsit1）在抗菌免疫過程中發(fā)揮的作用。首先克隆得到了全長1486bp的MjEcsit1cDNA序列，其完整開放閱讀框含有1221bp堿基對，編碼407個氨基酸。表達(dá)模式分析顯示MjEcsit1在不同組織中受到細(xì)菌尤其是革蘭氏陽性菌的刺激后表達(dá)量顯著升高。使用RNA干擾技術(shù)敲低對蝦體內(nèi)MjEcsit1表達(dá)后，對蝦感染金黃色葡

4、萄球菌（Staphylococcusaureus）會導(dǎo)致對蝦體內(nèi)抑制革蘭氏陽性菌生長的能力減弱，對蝦的死亡率顯著升高。同時，干擾MjEcsit1的表達(dá)，會抑制兩種抗脂多糖因子(Alf5，Alf6)類抗菌肽被金黃色葡萄球菌刺激所引發(fā)的上調(diào)表達(dá)。進(jìn)一步對這兩種抗脂多糖因子進(jìn)行功能檢測發(fā)現(xiàn)，它們的重組蛋白可以直接與細(xì)菌結(jié)合，在對蝦體內(nèi)分別干擾這兩種抗脂多糖因子的表達(dá)會降低對蝦對其體內(nèi)細(xì)菌的清除能力。這些結(jié)果表明MjEcsit1在對蝦體內(nèi)可能通

5、過調(diào)節(jié)兩種抗脂多糖因子(Alf5，Alf6)類抗菌肽的表達(dá)來參與抗革蘭氏陽性菌的免疫反應(yīng)。
　　為了鑒定MjEcsit1上游的模式識別受體，分別克隆得到日本囊對蝦中的三種Toll樣受體(MjTLR1，MjTLR2，MjTLR3），分別干擾三種Toll樣受體后，檢測MjEcsit1和兩種抗脂多糖因子Alf5，Alf6的表達(dá)發(fā)現(xiàn):抑制MjTLR3的表達(dá)會抑制金黃色葡萄球菌的刺激誘導(dǎo)的MjEcsit1和Alf5，Alf6的上調(diào)表達(dá)。以上