銜接蛋白Syntenin在日本囊對蝦先天免疫中的功能研究.pdf

1、海洋生物是人類食物的重要來源。對蝦是其中一種重要的海水經(jīng)濟養(yǎng)殖動物，然而對蝦養(yǎng)殖業(yè)易受到多種細菌和病毒的感染，遭受到巨大損失。因此，研究對蝦先天免疫機理，不僅可以為防治蝦病提供基礎理論指導，還能與模式生物的相關研究進行比較，具有重要的理論意義與應用價值。
　　細胞是最小的生命系統(tǒng)組成單位，在其內部的正常活動與秩序的維持中，胞內的銜接蛋白(Adaptor protein)起到不可忽視的作用。其正常的免疫活動，如信號轉導，細胞免疫等等

2、，都依賴于接頭蛋白才能有條不紊的進行。因此，研究對蝦接頭蛋白在免疫過程中的功能對于我們進一步了解對蝦的先天免疫機制和細胞中銜接蛋白的功能有重要的作用。
　　Syntenin蛋白是一種含有兩個串聯(lián)的PDZ(首次在突觸后密度蛋白PSD-95，DlgA和ZO-1中報道的重復序列)結構域的多功能的胞質內接頭蛋白，能夠參與到細胞粘附，遷移，分化，凋亡以及在脊椎動物的病毒的免疫反應過程中。但是，目前關于Syntenin蛋白在無脊椎動物的病毒免

3、疫和細菌免疫方面的功能和具體作用機理沒有研究。本文選取了日本囊對蝦（Marsupenaeus japonicus）做為實驗動物，克隆得到了Syntenin的同源基因，命名為MjSyn，并研究了該基因及其編碼的蛋白在對蝦免疫反應中的功能及其作用機理。MjSyn的cDNA全長共1223bp，其完整開放閱讀框為963 bp，共編碼320個氨基酸。結構域分析發(fā)現(xiàn)MjSyn共包含兩個PDZ結構域，一個N端區(qū)域和一個C端區(qū)域。MjSyn在對蝦各個組

4、織中均有分布，并且在受到金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），鰻弧菌（Vibrio anguillarum）和白斑綜合癥病毒(white spot syndrome virus，WSSV)刺激后，在不同時間點均有不同程度的上調表達。研究發(fā)現(xiàn)，通過RNAi方法干擾對蝦體內MjSyn的表達量后，對蝦對于細菌感染的清除能力下降了。利用血細胞吞噬熒光細菌的方法，表明干擾MjSyn影響了細胞對于細菌的吞噬能力，進而影響了對

5、蝦對細菌的清除能力。通過進一步篩選吞噬相關基因，我們發(fā)現(xiàn)干擾MjSyn后，日本對蝦中的Calnexin（MjCnx）的mRNA和蛋白的表達都受到抑制，這表明MjSyn可能通過影響calnexin相關途徑來影響細胞的吞噬過程。
　　在對蝦抗病毒免疫方面的研究中，我們發(fā)現(xiàn)干擾MjSyn后，病毒蛋白VP28在對蝦體內的復制減少。而過表達MjSyn后，病毒蛋白VP28的復制增加。體外pull-down和體內Co-IP實驗證明，全長MjSy

6、n可以結合病毒的囊膜蛋白VP24、VP28和VP26。全長蛋白中，結構域1+2與結構域C(CTD)都能夠分別結合這三種病毒蛋白。另外，實驗發(fā)現(xiàn)對蝦受到病毒刺激后，MjSyn向細胞膜遷移，呈極化分布，F(xiàn)-actin的遷移趨勢與MjSyn相吻合，因此兩者的共定位增加。值得注意的是，在病毒刺激后的血淋巴中能夠檢測到分泌出細胞外的MjSyn及VP28蛋白。這些結果表明，MjSyn通過結合病毒蛋白和調控F-actin的分布，促進病毒釋放的過程來參