EMS誘變花蕾結(jié)合小孢子培養(yǎng)獲得大白菜突變體的研究.pdf

1、大白菜(Brassica campestris ssp.pekinensis)是原產(chǎn)我國(guó)的重要蔬菜，在我國(guó)冬季的蔬菜供應(yīng)中居重要地位。大白菜育種材料單一已成為育種取得突破性進(jìn)展的瓶頸，創(chuàng)造具有豐富遺傳基礎(chǔ)的育種材料是大白菜育種工作者研究的重點(diǎn)之一。人工誘變可使自然突變率提高千倍以上，但人工誘變多為隱性突變，將人工誘變與小孢子培養(yǎng)相結(jié)合，可以迅速獲得基因型純合的突變體。
　　 本研究以10份不同基因型大白菜‘A01’、‘A06’、

2、‘23P02’、‘85-1’、‘12-2’、‘12-7’、‘A03’、‘A12’、‘A16’和‘A19’為試驗(yàn)材料，采用EMS為誘變劑，分別進(jìn)行了種子誘變、花蕾誘變結(jié)合游離小孢子培養(yǎng)方法的研究，確定了不同處理方法適宜的EMS濃度和處理時(shí)間，并對(duì)種子誘變后代和花蕾誘變后小孢子植株進(jìn)行了形態(tài)學(xué)鑒定及分子輔助鑒定，獲得了不同類型的變異材料。主要研究結(jié)果如下:
　　 1.以7份不同基因型大白菜種子為材料，研究了不同EMS濃度和時(shí)間浸泡種

3、子后種子的發(fā)芽率和成苗率。結(jié)果表明，在0～0.8％濃度范圍內(nèi)，隨著EMS濃度的增大，種子的發(fā)芽率和成苗率逐漸降低，初步確定大白菜種子誘變處理的適宜EMS濃度為0.4％～0.6％，處理時(shí)間為4～6h。
　　 2.通過(guò)對(duì)‘A01’、‘A03’、‘A06’和‘23P02’種子誘變M2代植株進(jìn)行全部形態(tài)學(xué)鑒定和部分分子學(xué)鑒定，共獲得49株突變株。從170株‘A01’的M2代中篩選到6株葉片變異株，1株晚抽薹變異株;83株‘A06’的M2

4、代植株中，葉片變異2株;76株‘23P02’的M2代植株中，7株包球方式變異株，1株大花冠變異株;285株‘A03’誘變?nèi)后w中，1株花蕾變異株，9株子葉變異株，7株苗期葉片變異株，15株花器變異株。
　　 3.以‘85-1’、‘12-2’、‘12-7’、‘A03’和‘A19’為試驗(yàn)材料，進(jìn)行花蕾誘變后結(jié)合小孢子培養(yǎng)，設(shè)置誘變濃度和時(shí)間梯度，篩選出在葉形、葉色、花冠大小、花色、抽薹性、抗霜霉病上的基因型純合突變體74株，突變頻率1

5、5.6％。綜合考慮小孢子出胚率、成苗率及有效突變體數(shù)，初步確定EMS誘變花蕾并結(jié)合小孢子培養(yǎng)這一技術(shù)適宜的濃度范圍為0.03～0.1％、處理時(shí)間5～10min。
　　 4.通過(guò)對(duì)EMS花蕾誘變后小孢子培養(yǎng)的再生植株倍性調(diào)查，發(fā)現(xiàn)在獲得的再生植株中二倍體植株所占的比例，隨EMS濃度增大而降低，單倍體所占比例隨EMS濃度增大而升高，初步證明EMS在誘變過(guò)程中對(duì)染色體的加倍起到抑制作用。
　　 5.通過(guò)對(duì)大白菜EMS種子誘變和