2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩111頁(yè)未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、甲殼動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)是我國(guó)重要的出口創(chuàng)匯產(chǎn)業(yè)。然而,自1992年白斑綜合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)病的爆發(fā),給我國(guó)乃至世界的水產(chǎn)養(yǎng)殖帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。因此,對(duì)參與病毒感染和復(fù)制的宿主蛋白進(jìn)行鑒定和功能分析,對(duì)預(yù)防和控制病毒性疾病有重要的意義。泛素化和SUMO化都需要激活酶E1,結(jié)合酶E2和連接酶E3的參與,從而對(duì)靶蛋白進(jìn)行特異性修飾。盡管類泛素SUMO的三維結(jié)構(gòu)和酶促反應(yīng)過(guò)程與泛素非常形似,但兩類

2、蛋白修飾的生物學(xué)意義卻迥然不同。本研究選擇對(duì)蝦泛素結(jié)合酶和小龍蝦SUMO結(jié)合酶,分別研究他們介導(dǎo)的泛素化和SUMO化在病毒感染和復(fù)制中的功能,進(jìn)而闡明甲殼動(dòng)物與白斑病毒相互作用的分子機(jī)理。
   1.中國(guó)明對(duì)蝦泛素結(jié)合酶E2(FcUbc)介導(dǎo)白斑綜合征病毒含有RING結(jié)構(gòu)域蛋白的泛素化,并抑制病毒的復(fù)制
   我們從中國(guó)明對(duì)蝦(Fenneropenaeus chinensis)中克隆得到了一個(gè)泛素結(jié)合酶E2,命名為FcU

3、bc。FcUbc的cDNA全長(zhǎng)967 bp,其中開(kāi)放閱讀框447 bp,編碼148個(gè)氨基酸,包含一個(gè)泛素結(jié)合酶E2催化結(jié)構(gòu)域(UBCc)。FcUbc特異性的分布于對(duì)蝦肝胰腺和小腸中,在受到白斑病毒刺激后,都呈現(xiàn)出上調(diào)表達(dá)的趨勢(shì)。在大腸桿菌(Escherichia coli)中重組表達(dá)并純化了FcUbc,用重組蛋白制備的多克隆抗體進(jìn)行免疫組化分析,結(jié)果顯示內(nèi)源FcUbc蛋白定位于肝胰腺的B細(xì)胞和小腸的上皮細(xì)胞。
   為了研究其功

4、能,除了重組表達(dá)FcUbc外,我們對(duì)FcUbc的催化活性位點(diǎn)進(jìn)行了突變,重組表達(dá)了其突變體mFcUbc。利用FcUbc重組蛋白注射對(duì)蝦,明顯降低了染毒對(duì)蝦的死亡率,并且大大抑制白斑病毒的復(fù)制。我們利用體外pull-down實(shí)驗(yàn)證實(shí)重組FcUbc能夠結(jié)合病毒的四個(gè)含有RING結(jié)構(gòu)域的蛋白(WRD1-4),后者被報(bào)道具有潛在的E3連接酶的功能,而突變體mFcUbc喪失了這樣的體外結(jié)合能力。更重要的是,體外泛素化實(shí)驗(yàn)和果蠅S2細(xì)胞系(Dros

5、ophila melanogaster Schneider2)上的實(shí)驗(yàn)都證實(shí)了FcUbc介導(dǎo)了WSSV277和WSSV304的RING結(jié)構(gòu)域的泛素化。在感染W(wǎng)SSV的果蠅S2細(xì)胞中,過(guò)表達(dá)的FcUbc增強(qiáng)了病毒W(wǎng)SSV277和WSSV304蛋白的泛素化。以上結(jié)果表明中國(guó)明對(duì)蝦FcUbc介導(dǎo)白斑病毒含RING結(jié)構(gòu)域蛋白的泛素化,并最終抑制病毒的復(fù)制。
   2.克氏原螯蝦SUMO結(jié)合酶(UBC9)介導(dǎo)白斑綜合征病毒極早期蛋白的SU

6、MO化修飾并最終促進(jìn)病毒復(fù)制
   我們從克氏原螯蝦(Procambarus clarkli)中克隆得到了小泛素樣修飾蛋白(small ubiquitin-related modifier, SUMO)和SUMO結(jié)合酶UBC9。UBC9 cDNA全長(zhǎng)912bp,開(kāi)放閱讀框483bp,編碼160個(gè)氨基酸,含有一個(gè)UBCc催化結(jié)構(gòu)域,活性位點(diǎn)是位于93位的保守的半胱氨酸。SUMO cDNA全長(zhǎng)960 bp,開(kāi)放閱讀框282 bp,編

7、碼93個(gè)氨基酸,含有一個(gè)泛素樣結(jié)構(gòu)域(UBQ),其活性位點(diǎn)是位于C末端的雙甘氨酸殘基。序列比對(duì)和進(jìn)化樹(shù)分析顯示UBC9和SUMO進(jìn)化上高度保守,小龍蝦的UBC9和SUMO與酵母和人類的蛋白表現(xiàn)出極高的相似性。UBC9和SUMO組成型的存在于小龍蝦各組織,在白斑病毒刺激后呈現(xiàn)上調(diào)表達(dá)。
   我們?cè)诖竽c桿菌中重組表達(dá)并純化了克氏原螯蝦的UBC9、SUMO,突變體mUBC9和mSUMO,及SUMO的活性形式SUMO-GG。向克氏原螯

8、蝦體內(nèi)注射UBC9或SUMO重組蛋白增強(qiáng)了WSSV的基因復(fù)制,而突變體mUBC9和mSUMO則喪失此功能。接下來(lái)我們進(jìn)一步分析了克氏原螯蝦SUMO化系統(tǒng)促進(jìn)白斑病毒復(fù)制的分子機(jī)理??耸显rUBC9蛋白體外結(jié)合WSSV三種極早期蛋白(IE,WSV051,WSV069和WSV187),其中只有WSV051能夠被宿主UBC9介導(dǎo)發(fā)生SUMO化修飾。利用干擾降低小龍蝦UBC9或SUMO的表達(dá)水平,導(dǎo)致病毒晚期基因表達(dá)被抑制,極早期基因表達(dá)也受

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論