棗外源小麥磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因(TaPT2)遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、棗（Ziziphus jujuba Mill.）原產(chǎn)我國，是我國當(dāng)今第一大干果樹種。磷素是植物必需的大量營養(yǎng)元素。土壤易出現(xiàn)缺磷現(xiàn)象，磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白是介導(dǎo)植物對磷素吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)的主體，在調(diào)控植株磷素吸收和利用效率中具有重要作用。通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)方法轉(zhuǎn)化棗，以期獲得可以高效吸收利用磷素的優(yōu)良耐缺磷轉(zhuǎn)基因植株。本試驗(yàn)建立了棗葉片不定芽高效再生體系，并實(shí)現(xiàn)了根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的TaPT2小麥磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因基因轉(zhuǎn)化，獲得了棗轉(zhuǎn)基因植株。
　　 主要

2、試驗(yàn)結(jié)果如下:
　　 1.建立了棗葉片不定芽高效再生體系。冬棗、月光棗、木棗3個品種葉塊在愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+麥芽糖20g/L+瓊脂5g/L+TDZ1.0mg/L+IBA0.1mg/L+ AgNO31.0mg/L上出愈率均可達(dá)到100％，差異不顯著。在芽分化培養(yǎng)基MS+蔗糖30g/L+瓊脂5 g/L+6-BA0.8 mg/L+IBA0.2 mg/L上，冬棗和月光棗不定芽出芽率顯著高于木棗，2個品種出芽率均超過了93％，而木棗僅為

3、66.63％。芽分化培養(yǎng)基附加不同GA3、6-BA、TDZ時，不定芽發(fā)生情況差異明顯。附加6-BA的培養(yǎng)基MS+蔗糖30 g/L+瓊脂5 g/L+ IBA0.2 mg/L+6-BA0.8～1.2 mg/L，可防止不定芽玻璃化，每葉塊出芽率和平均出芽數(shù)分別可達(dá)93.3％和3.53個。此外，乙酰丁香酮100 mg/L可顯著促進(jìn)冬棗葉塊不定芽發(fā)生，平均出芽數(shù)可高達(dá)7.30個，當(dāng)乙酰丁香酮達(dá)到200mg/L時，會導(dǎo)致再生不定芽的畸形。
　

4、　 2.確定了棗葉片再生臨界選擇壓。附加除草劑Basta0.4 mg/L時，葉塊不產(chǎn)生不定芽但不會停止分化，可作為葉片再生臨界選擇壓。0.6 mg/L作為莖段生長選擇壓，該系統(tǒng)能有效進(jìn)行篩選。
　　 3.建立了木棗葉片遺傳轉(zhuǎn)化體系。適宜的遺傳轉(zhuǎn)化條件為:葉片切割后針刺處理，預(yù)培養(yǎng)1天后，在OD600為0.6～0.8的菌液中侵染5min，在24℃條件下，在培養(yǎng)基MS+瓊脂5g/L+麥芽糖20g/L+TDZ1.0mg/L+IBA0