小麥WRKY基因的克隆、表達(dá)分析及其遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、WRKY轉(zhuǎn)錄因子是植物轉(zhuǎn)錄調(diào)控子家族成員之一，它可以特異地與W-box的結(jié)合，并調(diào)控啟動(dòng)子中含W-box元件的抗病、損傷、衰老相關(guān)基因的表達(dá)，進(jìn)而廣泛參與植物對(duì)生物脅迫和非生物脅迫的響應(yīng)。
　　 本研究首先利用植物WRKY蛋白的保守序列在小麥基因組數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索出大量高相似性的ESTs，并拼接獲得多條全長(zhǎng)序列。通過(guò)設(shè)計(jì)特異引物，采用PCR技術(shù)成功克隆到一條小麥WRKY基因的cDNA全長(zhǎng)序列。對(duì)該基因的序列比對(duì)結(jié)果顯示：它與小麥的T

2、aWRKY53a和TaWRKY53b的序列有較高的相似度，說(shuō)明此基因確實(shí)為小麥中的WRKY基因，并命名為T(mén)aWRKY53c。進(jìn)而對(duì)其進(jìn)行生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，TaWRKY53c蛋白具有兩個(gè)完整的WRKY結(jié)構(gòu)域和鋅指結(jié)構(gòu)，屬于典型的WRKY轉(zhuǎn)錄因子Ⅰ類(lèi)成員。且在與擬南芥Ⅰ類(lèi)WRKY蛋白的多序列比對(duì)中發(fā)現(xiàn)，該蛋白與AtWRKY33親緣進(jìn)化關(guān)系較近，文獻(xiàn)報(bào)道AtWRKY33參與擬南芥的抗鹽響應(yīng)，因此認(rèn)為它在小麥中可能參與該蛋白相似的信號(hào)通路。小

3、麥幼苗經(jīng)高鹽脅迫處理后，TaWRKY53c表達(dá)的組織及時(shí)空特異性的熒光定量PCR分析結(jié)果表明，該基因確實(shí)參與對(duì)高鹽脅迫的響應(yīng)，且短時(shí)間內(nèi)表達(dá)量增加九倍，并且在葉片中的表達(dá)量最高。
　　 為獲得具有抗鹽特性的轉(zhuǎn)基因小麥品種，構(gòu)建了TaWRKY53c的過(guò)表達(dá)載體，并利用基因槍技術(shù)將其轉(zhuǎn)化到小麥盾片中。再通過(guò)組織培養(yǎng)，獲得了大量再生植株，以備后續(xù)轉(zhuǎn)基因植株篩選。
　　 本論文的研究結(jié)果對(duì)闡明小麥中TaWRKY53c基因的生物學(xué)