小麥TaWRKY7基因的克隆、表達(dá)及其遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、WRKY蛋白是一類轉(zhuǎn)錄因子超家族，它們含有保守的WRKY結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域可以與DNA上的W盒結(jié)合，從而激活或抑制特定基因的表達(dá)。WRKY轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)節(jié)作用幾乎貫穿了植物的整個生長發(fā)育過程，如種子的萌發(fā)、植株的生長發(fā)育、衰老以及對生物和非生物逆境的響應(yīng)等。但是WRKY轉(zhuǎn)錄因子具體的調(diào)節(jié)機(jī)制還不是很清楚。
　　本研究利用DFCI數(shù)據(jù)庫中的小麥EST序列拼接得到小麥TaWRKY7基因的序列信息，并以小麥cDNA為模板，通過常規(guī)基因克隆技

2、術(shù)克隆得到該基因。利用生物信息學(xué)方法，進(jìn)行ORF的預(yù)測、蛋白質(zhì)的序列和結(jié)構(gòu)預(yù)測、蛋白質(zhì)各種理化性質(zhì)分析、同源性分析等。發(fā)現(xiàn)目的基因與HvWRKY7同源性較高，在97％的區(qū)域有94％的同源性，因此將目的基因命名為TaWRKY7；該基因翻譯的蛋白質(zhì)含有1個WRKY結(jié)構(gòu)域，鋅指結(jié)構(gòu)類型為C2H2，屬于Ⅱ類WRKY轉(zhuǎn)錄因子。
　　通過半定量RT-PCR分析TaWRKY7基因在小麥幼苗不同組織和不同非生物脅迫條件下的表達(dá)模式，推測其可能響應(yīng)

3、的逆境脅迫類型及參與的信號通路，結(jié)果表明：該基因在小麥葉片中的表達(dá)量最高，其次是根，莖中的表達(dá)量很低；在NaCl（200 mM）、PEG（20％）、ABA（100μM）和低溫（4℃）脅迫處理下，TaWRKY7對NaCl有響應(yīng)，在NaCl處理下其表達(dá)明顯上調(diào)。
　　另外還構(gòu)建了真核細(xì)胞表達(dá)載體pAHC25-TaWRKY7，利用基因槍介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法將其轉(zhuǎn)入鄭麥9023盾片中，通過組織培養(yǎng)獲得再生苗，然后對再生植株進(jìn)行分子鑒定，共獲