太湖鵝膽固醇7α-羥化酶基因啟動子的克隆及p53結(jié)合元件的初步鑒定.pdf

1、膽固醇7α-羥化酶（Cholestrol7α-Hydroxylase，CYP7A1）又稱膽固醇7α-單氧酶或細胞色素P4507A1酶，屬肝臟特異性微粒體細胞色素P450酶系，該酶位于肝細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上，作用是催化膽固醇生成7α-固醇，后者經(jīng)過固醇核還原、羥化、側(cè)鏈斷裂和加輔酶A等反應生成初級膽汁酸，同時CYP7A1也是此途徑的限速酶。大量研究證明，膽固醇-膽汁酸平衡對機體健康具有重要作用，血液膽固醇水平過高會引起高膽固醇血癥、動脈硬化、膽

2、結(jié)石等疾病，而膽汁酸水平過高則可能會導致膽囊癌、結(jié)直腸癌的發(fā)生。CYP7A1基因自身多態(tài)性、多種核受體、細胞因子、激素共同組成了CYP7A1基因表達的轉(zhuǎn)錄激活/抑制級聯(lián)網(wǎng)絡，維持體內(nèi)膽汁酸-膽固醇平衡及脂質(zhì)動態(tài)平衡。目前該基因在畜禽領域的研究還不夠深入，尤其是在轉(zhuǎn)錄水平的研究較少。有研究表明，CYP7A1基因表達和P53蛋白在肝臟細胞增殖、脂肪變性及細胞凋亡等過程中可能存在某種協(xié)同關(guān)系。本研究以鵝為實驗對象，成功地克隆了CYP7A1基因

3、啟動子區(qū)序列，并初步探索了該序列上P53蛋白的結(jié)合位點，以及P53蛋白對CYP7A1基因的調(diào)控作用。
　　 本實驗利用基因組步移技術(shù)，首次從鵝基因組DNA克隆到CYP7A1基因5'調(diào)控區(qū)序列，長為2004bp。利用在線軟件對所得序列結(jié)果進行了序列分析，預測了啟動子功能區(qū)和轉(zhuǎn)錄調(diào)控結(jié)合位點，其中P53的結(jié)合位點有6處。
　　 本研究根據(jù)CYP7A1基因5'調(diào)控區(qū)序列成功克隆了一組缺失突變體，將缺失突變體構(gòu)建重組雙熒光素酶報