北方部分省市番茄黃化曲葉病毒的檢測鑒定及辣椒分離物侵染性克隆構(gòu)建.pdf

1、番茄黃化曲葉病毒?。═omatoyellowleafcurlvirusdisease）是番茄生產(chǎn)中的一種毀滅性病害。番茄黃化曲葉病毒病于2006年在上海、江蘇和浙江等省蔬菜種植區(qū)相繼被發(fā)現(xiàn)，隨后從南方各省迅速擴展至北方的山東、河南、河北、北京、內(nèi)蒙古等地的保護地蔬菜種植區(qū)，在番茄生產(chǎn)上造成了嚴重的經(jīng)濟損失。隨著PCR技術(shù)、血清學檢測、滾環(huán)擴增等技術(shù)的發(fā)展，人們對番茄黃化曲葉病毒病有了一定的認識，并采取了相關(guān)措施減少經(jīng)濟損失。為了更好的了

2、解番茄黃化曲葉病毒病的發(fā)生區(qū)域、寄主范圍及其變異方向等，我們于2011年至2012年對中國北方河南、山東、河北、天津、吉林、內(nèi)蒙古等省份進行了番茄黃化曲葉病毒病的調(diào)查，采集樣品擴增全序列，對其分析。主要研究結(jié)果如下:
　　1.通過雙生病毒通用引物對樣品進行PCR檢測，選取陽性樣品使用番茄黃化曲葉病毒特異引物擴增全長并測定序列。利用軟件處理序列后發(fā)現(xiàn)，獲得的序列全長為2781個核苷酸，DNA-A共編碼6個開放閱讀框，病毒鏈編碼2個開

3、放閱讀框，編碼AV1(CP)和AV2，反義互補鏈有4個開放閱讀框，編碼AC1（Rep）、AC2、AC3和AC4，以及開放閱讀框AV2和AC1之間(對應核苷酸2617-147nt)的一個長313nt非編碼的基因共同區(qū)(intergenicregion，IR)。
　　2.選取GenBank中全國各個地區(qū)的番茄黃化曲葉病毒分離物進行相似性比對，結(jié)果表明所測得序列與以色列株系Tomatoyellowleafcurlvirus-Israel

4、(TYLCV-IL)相似性最高，為97.2％～98.3％。進化樹表明，我國北方大部分地區(qū)的番茄黃化曲葉病毒分離物屬于Tomatoyellowleafcurlvirus-Israel，并且分為3個亞組。對山東、河南、河北省TYLCV序列分析，發(fā)現(xiàn)TYLCV在這三個省處于一種平衡狀態(tài)，基因交流頻繁。
　　3.在山東省辣椒植株中發(fā)現(xiàn)番茄黃化曲葉病毒，為了分析其對辣椒、番茄等作物的致病性，采用基因克隆方法，構(gòu)建侵染性克隆pCAMBIA03