脊尾白蝦與三疣梭子蟹微孢子蟲病的病原和病理.pdf

1、江蘇啟東海水混養(yǎng)脊尾白蝦與三疣梭子蟹發(fā)生“肌肉白化病”。本文首先利用三種顯微技術對病原的外部形態(tài)和內(nèi)部結構進行觀察分析,初步確定其為兩種不同微孢子蟲,然后利用微孢子蟲通用引物擴增SSU rRNA基因序列,對兩種微孢子蟲進一步進行分子鑒定,最后對脊尾白蝦和三疣梭子蟹的病變組織進行了病理分析。結果如下:
　　脊尾白蝦微孢子蟲具包囊結構,包囊大小為5.4±0.55(4.4-6.6μm),一個包囊內(nèi)含8個孢子,孢子呈橢圓形,成熟孢子新鮮狀

2、態(tài)下大小為2.3±0.25(1.7-2.8μm)×1.5±0.19(1.2-1.9μm),固定后大小為2.0±0.16(1.7-2.3μm)×1.3±0.15(0.96-1.6μm),孢內(nèi)極絲一般環(huán)繞9～10圈,雙排排列,核單個,形態(tài)結構特征與Thelohania屬相似?？寺〖刮舶孜r微孢子蟲核糖體 SSU-ITS-LSU(部分)基因獲得的片段大小為1873bp。SSU rRNA基因系統(tǒng)發(fā)育分析表明其與Potaspora morhaphi

3、s親緣關系最近,序列相似性91％,而Potaspora morhaphis與脊尾白蝦微孢子蟲形態(tài)差異明顯。基于傳統(tǒng)生物學分類與分子生物學分類沖突,將其歸為未分類種 Microsporidium sp.。病理分析顯示:脊尾白蝦的鰓、胃、腸和肌肉內(nèi)均發(fā)現(xiàn)微孢子蟲寄生和不同程度的病變。其中,肌肉組織病變最嚴重:病蝦的頭胸甲、步足、腹部、尾扇等部位的肌肉均呈現(xiàn)白化癥狀,失去透明度,色澤如棉花般,原肌原纖維存在的空間被大量的球形包囊占據(jù),肌原纖維

4、斷裂,空泡數(shù)量增多,線粒體消失。鰓細胞膨大呈空泡狀,鰓膜壞死,核質(zhì)、細胞質(zhì)和細胞器消失。胃細胞胞漿基質(zhì)電子密度增大,孢子寄生在結締組織中脂滴附近。腸外膜上皮細胞核質(zhì)皺縮,部分肌層消失,孢子寄生在腸粘膜層和肌層之間。
　　三疣梭子蟹微孢子蟲無包囊包被,孢子外壁具有特殊的微絨毛結構,呈放射形,成熟孢子近似卵圓形,大小為1.8±0.11(1.6-2.1μm)×1.4±0.08(1.2-1.6μm),極絲9圈,單排規(guī)則排列,核單個,形態(tài)學

5、性狀與Ameson屬特征相同。三疣梭子蟹微孢子蟲核糖體SSU-ITS-LSU(部分)rRNA基因PCR擴增片段大小為1684bp, SSU rRNA基因系統(tǒng)發(fā)育研究表明其與Ameson屬親緣關系明顯,形態(tài)特征分類與分子生物學分類一致,因此,確定其為Ameson sp.。病理分析顯示:三疣梭子蟹的鰓、胃、腸和肌肉內(nèi)均同樣發(fā)現(xiàn)微孢子蟲寄生和不同程度的病變。其中,肌肉組織病變最嚴重,病蟹大螯、各步足、游泳足內(nèi)的肌肉明顯呈白化狀,失去透明度,肌