三疣梭子蟹（Portunus tritubercularus）“牛奶病”病原的鑒定及其組織病理學(xué)研究.pdf

1、三疣梭子蟹(Portunustritubercularus)于1981年已被列為我國(guó)海洋水產(chǎn)養(yǎng)殖對(duì)象。自50年代起，我國(guó)海洋生物科學(xué)工作者已對(duì)其陸續(xù)作了一些研究。由于三疣梭子蟹具有生長(zhǎng)快、環(huán)境適應(yīng)能力強(qiáng)、病害少、市場(chǎng)價(jià)格高、國(guó)內(nèi)外價(jià)格穩(wěn)定等特點(diǎn)，使得各地三疣梭子蟹養(yǎng)殖不斷升溫。隨著養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大和集約化程度的不斷提高，各種疾病接踵而至，特別是細(xì)菌性疾病，給三疣梭子蟹養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。 通過(guò)對(duì)2004年至2005年間在

2、浙江省舟山市三疣梭子蟹養(yǎng)殖及暫養(yǎng)場(chǎng)樣品采集和流行病學(xué)調(diào)查，發(fā)現(xiàn)了一種危害相當(dāng)嚴(yán)重的細(xì)菌性疾病，感染迅速，發(fā)病范圍廣，一旦發(fā)病很快就會(huì)蔓延全池。該病多發(fā)生于9月至翌年2月，9～11月的育肥期為發(fā)病高峰期。該病發(fā)病急，病程短，短時(shí)間出現(xiàn)大面積死亡。發(fā)病率高，達(dá)到60％左右，死亡率更高，基本上是100％，常造成急性死亡。本病的主要癥狀為在早期活動(dòng)減緩，呼吸困難，對(duì)外界刺激反應(yīng)慢或基本不反應(yīng)，潛于水底。隨著病情的發(fā)展，呼吸更加困難，常因缺氧而浮

3、出水面或爬上岸。到了晚期，食欲徹底的廢絕，各附肢關(guān)節(jié)膜處可見(jiàn)肌肉白濁，切斷附肢，肌肉液化成乳白色液體自然滴下。打開(kāi)頭胸甲，部分鰓絲變黑，有的鰓絲內(nèi)有細(xì)沙或泥土沉積，內(nèi)臟各組分已看不清，心血竇及消化系統(tǒng)僅可見(jiàn)大概形狀，肝胰臟、生殖腺溶解成乳白色，血淋巴液變?yōu)槿榘咨?，如牛奶一般流體物質(zhì)，自然流下。依照發(fā)病癥狀和當(dāng)?shù)仞B(yǎng)民的習(xí)慣，將其稱為“牛奶病”。 從患“牛奶病”的三疣梭子蟹體內(nèi)分離到3株病原菌S1、S2和A1，革蘭氏染色均為陰性、彎

4、或直的短桿菌、能運(yùn)動(dòng)，普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板均生長(zhǎng)良好。生理生化特征測(cè)定結(jié)果表明，所分離的3株菌分別與溶藻弧菌(Vibrioalginolyticus)、哈維氏弧菌(Vibrioharveyi)和惡臭假單胞菌(Pseudomonasputida)極其相似，進(jìn)一步對(duì)3株病原菌16SRNA基因序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增、測(cè)序和系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)的構(gòu)建，結(jié)果顯示菌株S1、S2和A1分別與溶藻弧菌、哈維氏弧菌和惡臭假單胞菌自然聚類(lèi)，親緣關(guān)系最近，相似性分別高達(dá)99.

5、80％、99.44％和99.79％。綜合以上結(jié)果可將S1、S2和A1菌分別鑒定為溶藻弧菌、哈維氏弧菌和惡臭假單胞菌。人工感染試驗(yàn)結(jié)果表明所分離的3株菌對(duì)三疣梭子蟹、中華絨螯蟹及昆明系小白鼠均有明顯的致病作用。其中人工感染發(fā)病的三疣梭子蟹癥狀與自然發(fā)病相似。藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明此3株菌均對(duì)環(huán)丙沙星、氧氟沙星、培氟沙星等高度敏感；而對(duì)磺胺二甲嗯唑鈉、磺胺二甲嘧啶鈉、磺胺嘧啶鈉等不敏感。 將人工感染發(fā)病的三疣梭子蟹分別取鰓、螯足肌肉、步足