江蘇地區(qū)鯽出血病病原的分離、鑒定及檢測方法研究.pdf

1、鯽（Crassius auratus）與金魚(Carassius auratus L.)的親緣關系較近，作為我國淡水養(yǎng)殖的名優(yōu)品種，養(yǎng)殖規(guī)模和養(yǎng)殖潛力越來越大，然而罕有關鯽病毒病方面的報道。鯉科皰疹病毒2型(CyHV-2)，又稱為皰疹造血器官壞死病毒（HVHNV）或金魚造血器官壞死病毒(GFHNV)，是一種可感染金魚的致病原。1992年秋季和1993年春季在日本西部養(yǎng)殖的金魚暴發(fā)皰疹病毒性造血器官壞死病，造成的死亡率幾乎達到了100％，

2、這是有關該病的首次報道。在此之后美國、臺灣、澳大利亞、英國和新西蘭相繼有該疾病暴發(fā)的報道。這些報道表明鯉科皰疹病毒2型在金魚中廣泛傳播。
　　 2011-2012，國內(nèi)某些異育銀鯽（Carassius aurutus gibelio）養(yǎng)殖的主要產(chǎn)區(qū)出現(xiàn)暴發(fā)性疾病，發(fā)病魚體表充血腹部腫脹，眼眶基部充血，鰓絲嚴重出血并發(fā)白，肌肉出血，脾腎有程度不一的出血，肝脾腫大，鰾出現(xiàn)點狀出血。為查明病因?qū)Πl(fā)病魚進行病原鑒定分析，顯微鏡鏡檢未發(fā)現(xiàn)

3、寄生蟲感染;用從病魚病灶組織分離得到的細菌進行人工回染試驗，20天內(nèi)試驗魚無死亡;電鏡下觀察到發(fā)病魚病灶組織細胞內(nèi)有大量不同生長期的球形病毒顆粒，病毒粒子有囊膜，直徑在90～170nm;提取病魚組織核酸，鯉春病毒血癥病毒(SVCV)、錦鯉皰疹病毒(KHV)、金魚造血器官壞死病毒(GFHNV)的特異性引物進行聚合酶鏈式反應(PCR)，結果只有GFHNV引物擴增出特異性的基因片段，測序結果表明其與GFHNV的參考序列有99％的相似性。用出現(xiàn)

4、典型癥狀發(fā)病魚的組織上清人工感染健康異育銀鯽，試驗魚在3d后陸續(xù)發(fā)病死亡，患病癥狀同自然發(fā)病癥狀，并從感染魚組織中檢測到GFHNV;將處理的病樣上清液接種在錦鯉鰭條細胞（KF）中7天后出現(xiàn)明顯的細胞病變（cytopathic effects，CPE），同時在經(jīng)過兩代盲傳后的細胞經(jīng)過PCR檢測也獲得了GFHNV陽性目的片段，并在電鏡下觀察到病毒粒子。根據(jù)上述結果，判定本次異育銀鯽暴發(fā)性疾病病因是GFHNV感染。
　　 為進一步研究

5、病毒特性，作者以典型癥狀發(fā)病魚組織勻漿液腹腔注射或浸泡對健康異育銀鯽進行該病毒生物學特性研究，得出GFHNV的宿主范圍包括金魚和鯽魚的普通變種，最適感染溫度20-25℃;GFHNV對異育銀鯽不同魚齡均有致病力，但幼魚比成魚更易感，且死亡高峰期提前。
　　 運用石蠟包埋及制備組織病理切片對患病鯽的鰓、腦、脾、腎、肝胰臟、腸等多個組織進行病理學研究，同時對其治病機理進行初步分析。該病癥主要表現(xiàn)為靶器官細胞出現(xiàn)腫脹、變性、增生的壞死現(xiàn)