鴨CD8α基因的克隆與表達(dá)調(diào)控初步分析.pdf

1、鴨CD8a基因克隆及表達(dá)調(diào)控初步分析鴨CD8a基因的克隆與表達(dá)調(diào)控初步分析摘要我國(guó)是養(yǎng)鴨大國(guó)，占全世界養(yǎng)殖量70％以上。但隨著養(yǎng)殖量的增加，鴨的病毒性疾病逐年增加，并日趨復(fù)雜，給養(yǎng)鴨業(yè)帶來(lái)了巨大的損失。病毒性雛鴨肝炎是一種主要侵害3周齡以?xún)?nèi)的雛鴨的疾病，在病毒感染過(guò)程中，主要侵害T淋巴細(xì)胞。CD8作為T(mén)淋巴細(xì)胞表面的重要標(biāo)志物，在抗病毒感染和細(xì)胞免疫體系中起著非常重要的作用。CD8a參與胸腺分化以及T細(xì)胞活化的信號(hào)傳導(dǎo)，而CD813主要

2、協(xié)助CD8a發(fā)揮生物學(xué)功能。已有研究證明，CD8a基因表達(dá)的調(diào)節(jié)可能存在包括CD8a特異性增強(qiáng)子和可能的沉默子在內(nèi)的多種順式調(diào)控元件和反式作用因子。CD8a基因DNA甲基化的改變也受胸腺高移動(dòng)性型框蛋白和IL4等多種因子影響，從而導(dǎo)致基因表達(dá)的變化或異常表達(dá)。而關(guān)于鴨的CD8a基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控和表觀(guān)遺傳調(diào)控至今尚不清楚。本研究通過(guò)構(gòu)建I型雛鴨病毒肝炎感染模型，在成功克隆鴨CD8a基因eDNA序列和啟動(dòng)子區(qū)的基礎(chǔ)上，對(duì)CD8a基因的表達(dá)特性和

3、表達(dá)調(diào)控進(jìn)行了初步分析，其主要研究結(jié)果如下：1分別以金定鴨、櫻桃谷北京鴨、番鴨、綠頭鴨和斑嘴鴨的脾臟組織eDNA為模板進(jìn)行RTPCR擴(kuò)增，成功獲得了金定鴨、櫻桃谷北京鴨、番鴨、綠頭鴨和斑嘴鴨CD8a基因CDS區(qū)，其長(zhǎng)度都為714bp。同時(shí)采用RACE技術(shù)克隆了金定鴨CD8aeDNA全序列，長(zhǎng)為1624bp，包括61bp的5UTR，849bp的3UTR，714bp的開(kāi)放閱讀框(ORF)。同時(shí)檢測(cè)了雛鴨肝炎易感組、抗性組和對(duì)照組的鴨CD8a

4、編碼序列，發(fā)現(xiàn)三者間主要突變發(fā)生在外顯子2。2以金定鴨、櫻桃谷北京鴨、番鴨、綠頭鴨和斑嘴鴨基因組DNA為模板，成功獲得了金定鴨、櫻桃谷北京鴨、番鴨、綠頭鴨和斑嘴鴨基因(包含全部編碼區(qū)和所有內(nèi)含子，去除5’和3’非編碼區(qū)序列)其CD8a基因編碼區(qū)序列長(zhǎng)分別為6568bp、6567bp、6488bp、6568bp和6577bp，都由6個(gè)外顯子和5個(gè)內(nèi)含子組成，除第一內(nèi)含子外，其他內(nèi)含子均符合“舀一ag”剪切法則。3對(duì)不同禽類(lèi)(金定鴨、櫻桃谷