番鴨催乳素基因的克隆與序列分析.pdf

1、就巢是影響家禽繁殖性能的主要因素之一，而催乳素是禽類就巢發(fā)生和維持的關(guān)鍵激素。從分子水平上研究催乳素對(duì)番鴨就巢的調(diào)控，對(duì)番鴨就巢分子機(jī)理的研究有重要的指導(dǎo)意義。本試驗(yàn)從番鴨腦垂體組織快速提取總RNA，根據(jù)國(guó)外已發(fā)表的北京鴨催乳素基因設(shè)計(jì)引物，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)方法擴(kuò)增獲得了特異性片段，將擴(kuò)增片段與載體連接、克隆、測(cè)序后進(jìn)行序列分析，為利用標(biāo)記輔助選擇或其他選育方法清除種鴨的就巢基因奠定基礎(chǔ)，以加快番鴨的遺傳進(jìn)展和提

2、高飼養(yǎng)效益。 (1)首次采用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增、克隆了番鴨催乳素基因，獲得了全長(zhǎng)為765bp的cDNA序列(基因登陸號(hào)：AM180924)。該序列最大的一個(gè)開(kāi)放閱讀框(ORF)從ATG開(kāi)始到TAA結(jié)束，共編碼229個(gè)氨基酸，分子量為25.8kDa，為進(jìn)一步研究鴨就巢性及PRL基因的多態(tài)性、表達(dá)與調(diào)控奠定了基礎(chǔ)。 (2)通過(guò)BLAST進(jìn)行相似性搜索，搜索結(jié)果表明該序列與催乳素的序列同源性最高。采用SignalIP對(duì)氨基酸

3、序列進(jìn)行潛在信號(hào)肽剪切位點(diǎn)預(yù)測(cè)，該氨基酸序列具有一個(gè)潛在信號(hào)肽剪切位點(diǎn)，位于第30-31個(gè)氨基酸之間，與家禽催乳素前體的信號(hào)肽裂解位點(diǎn)具有高度保守性。 (3)與已報(bào)道的北京鴨、馬崗鵝、皖西白鵝、萊茵鵝、家雞、火雞、鵪鶉等禽類催乳素基因的核苷酸序列及推導(dǎo)的氨基酸序列進(jìn)行比較，結(jié)果表明，不同品種間核苷酸序列同源性介于91.0％～99％之間，其中番鴨與北京鴨間的同源性最高(99％)，與皖西白鵝、萊茵鵝、馬崗鵝也有很高的同源性，均達(dá)到9

4、8％以上。經(jīng)推導(dǎo)的相應(yīng)氨基酸序列的同源性比較結(jié)果，番鴨與北京鴨氨基酸序列同源性為98.7％；與皖西白鵝、萊茵鵝、馬崗鵝分別為98.7％、98.3％、99.1％，與家雞、火雞、鵪鶉的同源性在91.7％～93.3％之間。同源性分析結(jié)果表明，番鴨與北京鴨親緣關(guān)系最近，其次是鵝品種；與家雞、火雞、鵪鶉也有很高的同源性，說(shuō)明催乳素基因在進(jìn)化過(guò)程中是相當(dāng)保守的。 (4)番鴨的催乳素氨基酸序列與北京鴨比較兩者并沒(méi)有太大差別，僅在第9位(K/E