兔短鏈脂肪酸受體GPR41和GPR43基因的鑒定.pdf

1、短鏈脂肪酸，主要包括乙酸、丙酸和丁酸，主要由腸道微生物發(fā)酵沒(méi)有被消化和不能被消化的碳水化合物生成。短鏈脂肪酸不僅是動(dòng)物體內(nèi)重要的能量來(lái)源（可提供牛60％-70％的能量需要，豬15％-24％的能量需要），而且是重要的信號(hào)分子，在很多生理過(guò)程中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。2003年，有研究表明短鏈脂肪酸能夠激活G蛋白偶聯(lián)受體GPR41和GPR43，并且GPR41和GPR43與短鏈脂肪酸結(jié)合對(duì)機(jī)體代謝、免疫等功能具有潛在的調(diào)控作用。迄今，關(guān)于GPR4

2、1和GPR43的研究主要集中在人、大鼠和小鼠上，對(duì)于兔基因組中是否含有GPR41和GPR43基因及其結(jié)構(gòu)、功能和組織表達(dá)情況尚未有研究報(bào)道。
　　本研究，首先確定兔全基因組中是否含有與人和嚙齒類動(dòng)物GPR41和GPR43基因序列相似的基因。然后檢測(cè)GPR41和GPR43基因是否在兔的各個(gè)組織中表達(dá)。若表達(dá)，通過(guò)巢式PCR法和蛋白印跡法分別在基因水平和蛋白水平檢測(cè)兔各組織中GPR41和GPR43的表達(dá)情況。
　　1、利用BLA

3、ST和DNAMAN等進(jìn)行序列分析運(yùn)用BLAST對(duì)比兔的基因組與人、大鼠、小鼠、牛和山羊的GPR41基因和GPR43基因。結(jié)果表明:兔的基因組合有GPR41和GPR43基因，且兔GPR41基因序列與人大鼠、小鼠、牛、和羊的GPR41基因序列的相似性分別為84％、80％、81％、84％和84％;兔GPR43基因序列與人、大鼠、小鼠、牛和羊的GPR43基因序列的相似性分別為83％、85％、84％、79％和81％。氨基酸序列對(duì)比，結(jié)果表明:GP

4、R41氨基酸序列與人、大鼠、小鼠、牛和羊的GPR41氨基酸序列的相似性分別為70％、75％、75％、74％和74％;GPR43氨基酸序列與人、大鼠、小鼠、牛和羊的GPR43氨基酸序列的相似性分別為79％、81％、82％、72％和73％。
　　2、巢式PCR檢測(cè)兔各組織中GPR41和GPR43 mRNA的表達(dá)采用巢式PCR技術(shù)，分別分析GPR41和GPR43基因在兔不同組織內(nèi)mRNA水平。結(jié)果表明:GPR41基因在除了下丘腦和垂體外

5、的各組織中都有表達(dá)，在肝臟、結(jié)腸和脂肪組織中表達(dá)量較高;肌肉和心臟組織表達(dá)量較少。GPR43基因在各組織中均有表達(dá)，在下丘腦和脂肪組織中表達(dá)量較高;肌肉和腎上腺組織表達(dá)量較少。
　　3、蛋白印跡法檢測(cè)兔各組織中GPR41和GPR43蛋白表達(dá)水平利用western-blot技術(shù)，分別檢測(cè)兔不同組織中GPR41和GPR43蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果表明:GPR41在除了下丘腦和垂體組織外的其他組織中均有表達(dá)，在肝臟組織中表達(dá)量較高，實(shí)驗(yàn)檢測(cè)