游離脂肪酸受體1(GPR40)MAPK信號通路與內(nèi)吞機(jī)制研究.pdf

1、脂肪酸不僅僅是人體的能量來源，同時也參加一系列的生理活動，比如免疫反應(yīng)和胰島素分泌。2003年，三個獨立的研究小組發(fā)現(xiàn)一系列的中長鏈脂肪酸能夠激活孤兒G蛋白偶聯(lián)受體GPR40。緊接著GPR40被命名為游離脂肪酸受體1(FFAR1)。GPR40僅在高濃度葡萄糖的存在下能夠促進(jìn)胰島β細(xì)胞葡糖依賴性的胰島素分泌，從而降低了低血糖的風(fēng)險，因此成為非常重要的治療2型糖尿病的靶標(biāo)。了解調(diào)控GPR40的信號通路為GPR40生理功能的闡述及糖尿病的藥物

2、設(shè)計提供理論的基礎(chǔ)。因此我們的研究著力于研究GPR40受體激活后內(nèi)吞的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制。我們構(gòu)建了融合GFP的表達(dá)載體，并篩選得到穩(wěn)定表達(dá)GPR40-EGFP受體的單克隆HEK293穩(wěn)定細(xì)胞株。熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，GPR40-EGFP主要分布在細(xì)胞膜上，也有很大部分位于胞內(nèi)。在配體100μM LA的刺激下，受體分布發(fā)生改變，集中到細(xì)胞核周圍，成點狀聚集分布。后期研究發(fā)現(xiàn)GPR40的內(nèi)吞主要通過clathrin依賴型的途徑并受arrestin-

3、3的調(diào)控。有趣的是，我們發(fā)現(xiàn)GPR40受體的本底細(xì)胞內(nèi)表達(dá)水平很高，而clathrin和arrestin-3的knockdown并不影響GPR40受體的本底性內(nèi)吞，暗示GPR40受體配體依賴性和不依賴性的內(nèi)吞機(jī)制并不相同。
　　 所有的G蛋白偶聯(lián)受體都能夠促進(jìn)MAPK的信號級聯(lián)反應(yīng)，參與調(diào)控細(xì)胞增殖和凋亡。促分裂素原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，MAP激酶，MAPK)鏈?zhǔn)钦婧松?/p>

4、物信號傳遞網(wǎng)絡(luò)中的重要途徑之一，其中細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellular regulatedprotein，ERK)為MAPK家族重要成員。ERK1/2信號途徑對細(xì)胞的分裂、遷移和細(xì)胞凋亡等起到調(diào)控作用，如GLP-1受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)能夠通過ERK1/2途徑抑制胰島β細(xì)胞的凋亡。糖尿病產(chǎn)生的重要原因之一是胰島素β細(xì)胞的損傷，因此，研究GPR40如何調(diào)控ERK1/2途徑以及ERK1/2途徑是否參與胰島β細(xì)胞的增殖和凋亡過程具有重要