雌激素和孕激素對體外培養(yǎng)奶牛破骨細(xì)胞增殖分化的影響.pdf

1、目的：觀察不同濃度雌激素、孕激素對體外培養(yǎng)的破骨細(xì)胞增殖分化的影響。 方法：無菌取出新生奶牛的股骨用機(jī)械分離酶消化結(jié)合法獲取破骨細(xì)胞，進(jìn)行培養(yǎng)，通過形態(tài)學(xué)觀察、Giemsa染色、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鑒定后作為試驗(yàn)?zāi)Ｐ?，將用?0％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液配制的不同濃度的雌激素、孕激素與破骨細(xì)胞共同培養(yǎng)，采用MTT法觀察雌激素、孕激素對破骨細(xì)胞增殖功能的影響(用波長450處OD值表示)及奶牛破骨細(xì)胞的生長曲線，用抗酒

2、石酸酸性磷酸酶測試盒測定雌激素、孕激素對破骨細(xì)胞分化的影響(用抗酒石酸酸性磷酸酶活性表示)。 結(jié)果：采用機(jī)械分離酶消化結(jié)合法獲得的細(xì)胞具有典型破骨細(xì)胞的形態(tài)特征，細(xì)胞經(jīng)抗酒石酸酸性磷酸酶染色呈陽性且陽性率達(dá)92％，Giemsa染色有空泡顯示，符合破骨細(xì)胞的生物學(xué)特性，表明培養(yǎng)的細(xì)胞為高純度的破骨細(xì)胞。加雌激素、孕激素培養(yǎng)后測定細(xì)胞增殖結(jié)果顯示：不同濃度的雌激素、孕激素均能抑制破骨細(xì)胞的增殖。在10<'-9>mol/L-10<'-

3、5>mol/L雌激素、孕激素濃度范圍內(nèi)的抑制作用呈現(xiàn)劑量一效應(yīng)關(guān)系，與對照組相比，10<'-9>mol/L-10<'-8>mol/L雌激素試驗(yàn)組可抑制破骨細(xì)胞破骨細(xì)胞增殖，但與對照組差異不顯著(P>0.05)，10<'-7>mol/L-10<'-5>mol/L雌激素試驗(yàn)組與對照組比較均有極顯著性差異(P<0.01)，以10<'-7>mol/L試驗(yàn)組最為顯著(P<0.01)；10<'-7>mol/L-0<'-7>mol/L孕激素試驗(yàn)組可抑

4、制破骨細(xì)胞增殖，但與對照組差異不顯著(P>0.05)，10<'-6>mol/L-10<'-5>mol/L孕激素試驗(yàn)組與對照組比較均有極顯著性差異(P<0.01)，以10<'-8>mol/L試驗(yàn)組最為顯著(P<0.01)；10<'-9>mol/L-10<'-5>mol/L雌激素和孕激素混合組與對照組相比，10<'-9>mol/L-10<'-8>mol/L雌激素、孕激素混合試驗(yàn)組差異不顯著(P>0.05)，10<'-7>mol/L-10<'

5、-5>mol/L雌激素、孕激素混合試驗(yàn)組與對照組比較均有極顯著性差異(P<0.01)，以10<'-7>mol/L試驗(yàn)組最為顯著(P<0.01)；結(jié)果顯示孕激素對雌激素有協(xié)同促進(jìn)作用。雌激素、孕激素對奶牛破骨細(xì)胞的抑制增殖作用還存在時間一效應(yīng)關(guān)系，隨著時間的延長，吸光度值下降，至第7d，吸光度值最低，到第8d，吸光度值有所上升。不同濃度的雌激素、孕激素均能抑制破骨細(xì)胞的分化，但與對照組比較差異不明顯(P>0.05)。 結(jié)論：雌激素