雌激素通過EphB-EphrinB信號通路對破骨細胞分化的調(diào)節(jié).pdf

1、絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松是絕經(jīng)后婦女的常見病。絕經(jīng)后,雌激素缺失造成破骨細胞和成骨細胞功能異常,引起骨形成失衡。其中破骨細胞分化和功能異常造成的骨吸收增強是骨質(zhì)疏松發(fā)生重要的病理基礎(chǔ)。近期研究發(fā)現(xiàn)EphB/EphrinB家族在維持骨穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮重要的作用,其雙向信號通路能夠同時影響正常小鼠成骨細胞和破骨細胞的分化。本實驗通過培養(yǎng)卵巢摘除骨質(zhì)疏松模型小鼠破骨細胞以及雌激素受體拮抗劑(ICI182780)、雌激素等誘導(dǎo)破骨細胞RAW264.7,研究雌激

2、素通過EphB/EphrinB對破骨細胞分化的調(diào)節(jié)。
　　方法:
　　1、采用雌激素及雌激素拮抗劑分別誘導(dǎo)培養(yǎng)RAW264.7破骨細胞系,培養(yǎng)至第8天提取RNA和蛋白質(zhì)樣品,利用RT-PCR和Western blot檢測破骨細胞系表達的相關(guān)Eph/Ephrin信號通路的變化。2、采用RANKL誘導(dǎo)法培養(yǎng)卵巢摘除骨質(zhì)疏松模型(OVX)組和假手術(shù)(sham)組小鼠的破骨細胞,于第10天提取兩組細胞的RNA和蛋白質(zhì)樣品,通過RT-

3、PCR和Western blot檢測細胞EphrinB2表達的變化。3、在 OVX模型組小鼠的破骨細胞培養(yǎng)中添加 EphrinB2配體EphB4-Fc片段,通過RT-PCR檢測破骨細胞標志物的表達和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色并計數(shù),觀察破骨細胞分化能力的變化。4、采用RANKL誘導(dǎo)法培養(yǎng)卵巢摘除骨質(zhì)疏松模型(OVX)組和假手術(shù)(sham)組小鼠的破骨細胞,通過RT-PCR檢測兩組細胞中EphrinB1表達的變化;在OVX模型組小

4、鼠的破骨細胞培養(yǎng)中添加EphrinB1配體EphB2-Fc片段,通過RT-PCR檢測破骨細胞標志物的表達,TRAP染色并計數(shù),觀察破骨細胞分化能力的變化。
　　結(jié)果:
　　1、雌激素拮抗劑組EphrinB2的表達量低于對照組(P<0.01),而雌激素組EphrinB2的表達量高于對照組(P<0.05);2、卵巢摘除骨質(zhì)疏松模型組小鼠EphrinB2的表達量低于假手術(shù)組(P<0.01);3、給予EphrinB2配體EphB4-

5、Fc片段后,OVX組小鼠的相關(guān)破骨細胞標志物表達量降低(P<0.01;P<0.001),TRAP染色陽性細胞數(shù)減少;4、卵巢摘除骨質(zhì)疏松模型組小鼠EphrinB1的表達量低于假手術(shù)組(P<0.01);給予 EphrinB1配體 EphB2-Fc片段后,OVX組小鼠的相關(guān)破骨細胞標志物表達量降低(P<0.05),TRAP染色陽性細胞數(shù)減少。
　　結(jié)論:
　　雌激素可能通過調(diào)節(jié)破骨細胞EphrinB2、EphrinB1的表達影響