植物雌激素對(duì)大鼠成骨細(xì)胞生物活性影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：隨著全球人口老齡化，骨質(zhì)疏松成為人們所面臨的一個(gè)重要的問題。絕經(jīng)后婦女，很可能由于缺乏雌激素而患有骨質(zhì)疏松。 中藥(traditional chinese medicine，TCM)在治療骨折方面有著悠久的歷史。補(bǔ)骨脂和菟絲子是祖國(guó)醫(yī)學(xué)中治療骨折的常用藥，近代人們用它們來防治骨質(zhì)疏松。異補(bǔ)骨脂素和山萘酚是分別從補(bǔ)骨脂和菟絲子中提取的單體化合物，屬于植物雌激素中香豆素類植物雌激素和黃酮類植物雌激素。我們預(yù)期異補(bǔ)骨脂素和山萘酚

2、可能有防治骨質(zhì)疏松的作用。本實(shí)驗(yàn)采用大鼠成骨細(xì)胞體外培養(yǎng)的方法，應(yīng)用分子生物學(xué)等實(shí)驗(yàn)技術(shù)，在細(xì)胞和分子水平研究植物雌激素異補(bǔ)骨脂素和山萘酚對(duì)大鼠成骨細(xì)胞增殖、分化，分泌蛋白I型膠原(COLI)和細(xì)胞因子中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β1)，巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)表達(dá)的影響，來進(jìn)一步探討植物雌激素在骨代謝中的作用，并為抗骨松新藥開發(fā)，中藥現(xiàn)代化提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 1、采用改良的組織塊法分離培養(yǎng)新生(24 h)S

3、D大鼠顱骨成骨細(xì)胞。將不同濃度的異補(bǔ)骨脂素(10<'-9>mol/L～10<'-5>mol/L)及山萘酚(10<'-9>mol/L～10<'-5>～mol/L)加入到培養(yǎng)成骨細(xì)胞的培養(yǎng)基中，用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)和數(shù)量的改變。 2、采用噻唑藍(lán)比色(MTT)法，以雌激素(estrogen，E<,2>)為陽性對(duì)照，考察了加藥后，異補(bǔ)骨脂素和山萘酚24 h，48 h，72h對(duì)大鼠成骨細(xì)胞增殖的影響。 3、采用對(duì)硝基苯二鈉

4、基質(zhì)動(dòng)力學(xué)法(pNPP)法，以雌激素為陽性對(duì)照，檢測(cè)了異補(bǔ)骨脂素和山萘酚在24 h，48 h和72 h對(duì)大鼠成骨細(xì)胞堿性磷酸酶活性的影響。 4、采用放射免疫法(radioimmunoassay，RIA)測(cè)定了含異補(bǔ)骨脂素培養(yǎng)基的大鼠成骨細(xì)胞在48 h和72 h時(shí)骨鈣素的含量。 5、采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcriptase PCR．RT-PCR)方法，以雌激素為陽性對(duì)照，檢測(cè)含有異補(bǔ)骨脂素培養(yǎng)

5、基的大鼠成骨細(xì)胞在72 h時(shí)I型膠原(COLI)mRNA，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-β1)mRNA，巨噬細(xì)胞集落刺激因子，(M-CSF)mRNA的表達(dá)。 結(jié)論： 1、一定劑量的異補(bǔ)骨脂素和山萘酚可以促進(jìn)成骨細(xì)胞的增殖與分化。一定劑量的異補(bǔ)骨脂素促進(jìn)成骨細(xì)胞分泌蛋白I型膠原(COLI)mRNA．的表達(dá)，上調(diào)細(xì)胞轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF-B<,1>)mRNA的表達(dá)，并且能夠下調(diào)巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)mRNA的表達(dá)，說明