轉(zhuǎn)DR1372基因擬南芥及甘藍(lán)型油菜的耐鹽性研究.pdf

1、隨著植物遺傳與分子生物學(xué)的發(fā)展應(yīng)用，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)提高農(nóng)作物的鹽耐受性，正受到越來(lái)越多的關(guān)注。擬南芥（Arabidopsisthaliana）屬十字花科植物，生長(zhǎng)周期短、結(jié)實(shí)多且形態(tài)特征分明，是典型的自交繁殖植物，易于保持遺傳穩(wěn)定性。所以，擬南芥可以方便的進(jìn)行人工雜交，利于遺傳研究。甘藍(lán)型油菜（BrassicanapusL.）同屬十字花科植物，是一種重要的蔬菜和油料作物，因此利用生物技術(shù)手段提高油菜的耐鹽性，具有重要的潛在生產(chǎn)應(yīng)用價(jià)值。

2、
　　DR1372基因是在耐輻射奇球菌（DeinococcusRadiodurans，DR）中克隆得到的一個(gè)基因，因其蛋白中存在一個(gè)WHy結(jié)構(gòu)域，在植物中具有抗水分脅迫等干燥應(yīng)答機(jī)制，很可能會(huì)參與油菜的鹽脅迫應(yīng)答。本研究首先構(gòu)建pBI121-DR1372植物表達(dá)載體，然后利用農(nóng)桿菌蘸花法成功將目的基因DR1372轉(zhuǎn)入擬南芥中，同時(shí)對(duì)轉(zhuǎn)基因擬南芥幼苗進(jìn)行不同濃度鹽脅迫反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)當(dāng)NaCL濃度達(dá)到300mmol/L時(shí)，非轉(zhuǎn)基因擬南芥絕

3、大部分萎焉死亡，轉(zhuǎn)基因植株雖然葉片和莖部出現(xiàn)萎焉發(fā)紫，但死亡程度較小，部分植株仍能正常生長(zhǎng)存活;對(duì)轉(zhuǎn)基因擬南芥成熟植株進(jìn)行250mmol/L鹽脅迫試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)脅迫至第25d，非轉(zhuǎn)基因擬南芥的葉片受害程度達(dá)到5級(jí)，葉片幾乎全部萎焉，逐漸死亡。此時(shí)，轉(zhuǎn)基因擬南芥葉片的萎焉比僅有1/5。這表明DR1372基因提高了擬南芥的鹽脅迫耐受能力。
　　然后，本研究以甘藍(lán)型油菜下胚軸為外植體，利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法對(duì)甘藍(lán)型油菜進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，并對(duì)影響遺傳轉(zhuǎn)

4、化效率及再生頻率的幾個(gè)重要因素進(jìn)行探討，成功獲得了轉(zhuǎn)DR1372基因油菜。在不同NaCl濃度梯度以及在相同NaCl濃度下(350mmol/L)，分別對(duì)轉(zhuǎn)基因油菜與非轉(zhuǎn)基因油菜的鹽脅迫耐受力及其形態(tài)特征進(jìn)行了觀察，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:轉(zhuǎn)DR1372基因油菜在350mmol/LNaCl高鹽脅迫下，盡管某些相關(guān)形態(tài)特征發(fā)生了改變，但仍能夠正常生長(zhǎng)發(fā)育，而非轉(zhuǎn)基因油菜在200mmol/LNaCl以上濃度的脅迫兩周后均發(fā)生嚴(yán)重的葉片萎焉現(xiàn)象，隨著鹽脅迫