小鼠和山羊性成熟前卵泡發(fā)育與雌激素受體表達及其調(diào)控研究.pdf

1、動物發(fā)育良好的卵子經(jīng)體外成熟、授精、胚胎培養(yǎng)可獲得完整的后代個體，大量的比較研究證實性成熟前一些哺乳動物如小鼠、豬、牛、山羊等卵泡卵子在體外成熟和受精后的發(fā)育能力很低，甚至不形成胚胎，這顯示性成熟前卵母細胞發(fā)育存在缺陷，造成這種缺陷的原因或機制尚不清楚。人們試圖通過一些途徑或方法如改善培養(yǎng)介質(zhì)、使用各種刺激等提高性成熟前卵泡發(fā)育的潛能，一直未達到預期效果，這顯然制約對性成熟前雌性動物卵泡卵子的利用，成為動物克隆、胚胎移植工程中的關(guān)鍵科學

2、問題和技術(shù)難題。
　　 針對上述科學問題，本研究以小鼠、沂蒙黑山羊、波爾山羊為動物模型，以性成熟的卵巢卵泡為對照，使用連續(xù)組織切片技術(shù)、HE染色技術(shù)、免疫組織化學方法、放射免疫技術(shù)、熒光定量RT-PCR等技術(shù)設計了一系列的科學試驗，探討了卵巢卵泡發(fā)育、雌激素分泌和α、β兩種雌激素受體表達性成熟前后的差異規(guī)律；另外，研究了使用外源性激素E2、FSH和LH處理對性成熟前小鼠卵泡發(fā)育、雌激素分泌及其受體表達的影響，為探索改善卵泡發(fā)育潛

3、能的途徑和方法提供科學依據(jù)。實驗結(jié)果表明：
　　 1.小鼠血液雌激素在性成熟前(25d)較低，而性成熟(32d至38d)極顯著升高(P<0.01)，且維持較高的水平；隨日齡增加，小鼠卵巢卵泡發(fā)育漸至成熟，其內(nèi)α型雌激素受體和β型雌激素受主要分布于顆粒細胞內(nèi)，呈現(xiàn)不同的表達規(guī)律：性成熟α型受體表達極少，到性成熟后顯著升高(P<0.01)；β型受體性成熟前大量表達，較α型受體多，性成熟后略有降低。
　　 2.沂蒙黑山羊和波爾

4、山羊性成熟前卵巢皮質(zhì)較薄，原始卵泡和初級卵泡數(shù)量多，發(fā)育不充分，細胞結(jié)構(gòu)較完整，形態(tài)小，成熟卵泡很少；性成熟卵巢和卵泡發(fā)育良好可見明顯的黃體結(jié)構(gòu)，初級卵泡、次級卵泡豐富，成熟卵泡較多。性成熟前波爾山羊和沂蒙黑山羊卵巢α、β雌激素受體表達均低于性成熟卵巢內(nèi)的表達；且無論性成熟前還是性成熟卵巢，α雌激素受體的表達均顯著低于β雌激素受體。
　　 3.經(jīng)E2、FSH和LH處理的20日齡小鼠可以不同程度增加卵泡的數(shù)量，經(jīng)FSH和LH處理的

5、小鼠優(yōu)勢卵泡數(shù)量較多，排卵提前；經(jīng)三種激素處理后卵泡內(nèi)α、β兩種雌激素受體陽性顆粒細胞增多，其中FSH和LH對α雌激素受體增加顯著，優(yōu)勢卵泡內(nèi)顆粒細胞增加顯著；雌激素分泌在三種激素作用下變化不一致，其中FSH和LH具有促進內(nèi)源性雌激素分泌的作用，而外源性雌激素有降低內(nèi)源性雌激素作用的趨勢。
　　 結(jié)論：小鼠和山羊研究證實性成熟前卵泡雌激素受體表達較性成熟低，這可能是卵泡卵子發(fā)育潛能低下重要原因之一；使用合適的調(diào)控處理方法可以改善