鱗莖貯藏時(shí)間對(duì)誘導(dǎo)大蒜四倍體植株的影響.pdf

1、大蒜種質(zhì)資源豐富、優(yōu)良品種眾多，但由于長期采用無性繁殖，不能進(jìn)行雜交育種，其遺傳學(xué)和生物學(xué)多樣性未得到充分利用，也有一些優(yōu)良的品種因種性退化而瀕臨滅絕。利用多倍體誘導(dǎo)技術(shù)培育的多倍體蔬菜，無論是抗逆性，抗病性，還是品質(zhì)方面與二倍體相比均存在很多優(yōu)勢(shì)，為蔬菜優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)育種開辟了一條重要的途徑。利用愈傷組織誘導(dǎo)植株又稱為大蒜快繁技術(shù)，是近年來為提高大蒜繁殖系數(shù)，提純復(fù)壯，避免種性退化，得到迅猛發(fā)展的一項(xiàng)新技術(shù)，現(xiàn)已得到以大蒜莖尖，氣生鱗芽等為

2、外植體的通過愈傷組織誘導(dǎo)出的不定芽體系。在大蒜快繁技術(shù)的基礎(chǔ)上利用秋水仙素誘導(dǎo)大蒜四倍體再生體系是大蒜多倍體育中的新途徑。
　　 大蒜自6月份收獲，經(jīng)歷后熟、休眠后，到9月份由于夜間溫度下降，蒜鱗莖開始解除休眠。大蒜在貯藏過程中，鱗莖薄壁細(xì)胞衰退，其營養(yǎng)物質(zhì)供給幼芽萌發(fā)生長，伴隨著幼芽的不斷生長，鱗莖逐漸進(jìn)入衰亡過程，營養(yǎng)物質(zhì)含量下降，酶活性降低。因此尋找大蒜整個(gè)貯藏時(shí)期的最佳微繁擴(kuò)繁時(shí)間有著重要的意義，但目前關(guān)于這一方面的報(bào)道

3、還不多見。
　　 試驗(yàn)于2009-2011年在山東農(nóng)業(yè)大學(xué)科技創(chuàng)新園和農(nóng)業(yè)部園藝作物重點(diǎn)開放試驗(yàn)室進(jìn)行。研究探討了，大蒜愈傷組織誘導(dǎo)及增殖分化的影響因素，建立了大蒜愈傷組織誘導(dǎo)、增殖及器官分化的培養(yǎng)體系，在此基礎(chǔ)上分別研究了貯藏時(shí)間和秋水仙素對(duì)大蒜再生體系的影響，并進(jìn)一步開展了貯藏時(shí)間與秋水仙素對(duì)大蒜四倍體再生體系的互作效應(yīng)研究。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.影響大蒜愈傷組織誘導(dǎo)的因素
　　 鱗芽莖盤、基部及莖尖

4、誘導(dǎo)的愈傷組織出愈量較高，出愈率高，為大蒜外植體的最優(yōu)選擇：與此相比鱗莖中部誘導(dǎo)的愈傷組織質(zhì)量較差，出愈率較低，作為外植體效果不理想。選用外植體的基因型及規(guī)格對(duì)大蒜愈傷組織的再生影響較大，最佳選擇為蘇聯(lián)蒜0.3×0.2×0.2cm規(guī)格的外植體?？股乜捎行p少大蒜愈傷組織生長過程中的染菌率。愈傷組織誘導(dǎo)最佳光照條件為黑暗處理，繼代培養(yǎng)及分化最佳光照度為36μmol·m-2、s-1(16h/d)。
　　 試驗(yàn)表明，較高濃度的生長素

5、和較低濃度的細(xì)胞分裂素組合有利于蘇聯(lián)蒜鱗芽愈傷組織的誘導(dǎo)，但并不利于其分化。其中，2，4-D對(duì)愈傷組織的發(fā)生起決定作用，MS+2.0mg/L2，4-D+1.0mg/L6-BA有利于大蒜愈傷組織的產(chǎn)生，MS+2.0mg/LNAA+1.0mg/L6-BA較適宜于愈傷組織增殖和芽分化，無激素的培養(yǎng)基利于生根。
　　 2.貯藏時(shí)間對(duì)大蒜再生體系的影響
　　 本試驗(yàn)采用收獲后不同貯藏時(shí)間的大蒜鱗莖作為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)，研究了貯藏

6、時(shí)間對(duì)大蒜誘導(dǎo)愈傷組織，誘導(dǎo)脫分化不定芽，不定根的生成以及鱗芽誘導(dǎo)不定芽的影響。結(jié)果表明，在大蒜收獲后貯藏期間，外植體的出愈率、出愈量、胚性愈傷組織率，分生不定芽的直徑、發(fā)芽率、平均發(fā)芽數(shù)，分生不定根的生根率、平均生根數(shù)，以鱗莖基部及莖尖誘導(dǎo)不定芽的發(fā)芽率、平均發(fā)芽數(shù)的最高點(diǎn)出現(xiàn)在收獲后61～122d(即大蒜打破休眠幼芽萌動(dòng)時(shí)期)。
　　 3.秋水仙素對(duì)大蒜再生體系的影響
　　 以經(jīng)秋水仙素浸泡的大蒜鱗芽為外植體，建立大

7、蒜四倍體無性繁殖體系。結(jié)果表明，鱗芽基部為誘導(dǎo)四倍體不定芽的最適外植體；進(jìn)行四倍體誘導(dǎo)的最佳處理為0.1％的秋水仙素浸泡36h，其不定芽誘導(dǎo)的適宜培養(yǎng)基為MS+2.0mg/L2，4-D+1.0mg/L6-BA，不定芽生根的最適培養(yǎng)基為基本MS培養(yǎng)基。
　　 4.貯藏時(shí)間對(duì)大蒜四倍體再生體系的影響
　　 本試驗(yàn)采用收獲后不同貯藏時(shí)間的大蒜鱗莖作為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)，研究了貯藏時(shí)間對(duì)大蒜誘導(dǎo)四倍體植株(愈傷組織，誘導(dǎo)脫分化不

8、定芽，不定根的生成以及鱗芽誘導(dǎo)不定芽)的影響。研究發(fā)現(xiàn)貯藏時(shí)間對(duì)大蒜四倍體再生植株的影響與大蒜再生植株的影響一致，呈明顯的先上升后下降趨勢(shì)，但染色體變異植株占總發(fā)芽植株的百分比變化比較平緩。由于經(jīng)長期培養(yǎng)的愈傷組織常常會(huì)分化出變異植物，即體細(xì)胞無性系變異。因此大蒜經(jīng)愈傷組織途徑生成的再生植株變異率較高，但四倍體生成率較低。然而，由于秋水仙素直接作用于外植體對(duì)再生植株的染色體加倍效果較明顯，所以經(jīng)不定芽組織途徑生成的再生植株變異率較低，但