脂聯(lián)素對皖南花豬下丘腦生殖內(nèi)分泌的影響.pdf

1、皖南花豬是安徽省黃山市的地方優(yōu)良豬種之一,具有繁殖率高、產(chǎn)仔多、肉質好等優(yōu)良特性。脂聯(lián)素是主要由脂肪組織細胞分泌的一種生物活性物質,與動物的生殖性能有著十分密切的關系。本試驗通過測定分析皖南花豬血清中脂聯(lián)素(Adiponectin,Adp),GnRH和GnIH含量;下丘腦組織中脂聯(lián)素、脂聯(lián)素受體(Adiponectin receptor,AdpR)、GnRH和GnIH基因表達量的發(fā)育性變化規(guī)律及相關性,進而探討Adp與皖南花豬生殖作用的

2、聯(lián)系。通過重組脂聯(lián)素(recombinant adiponectin,rAdp)對小鼠下丘腦GnRH細胞和GnIH細胞的GnRH和GnIH基因表達的影響,探索Adp對下丘腦生殖激素合成的影響。
　　1、體內(nèi)試驗:脂聯(lián)素與GnRH和GnIH在皖南花豬下丘腦組織中的發(fā)育性變化及其相關性研究
　　隨機選取0d、30d、45d、90d、180d的皖南花豬各10頭(公、母各5頭)進行試驗。ELISA法測定血清中Adp、GnRH和GnI

3、H激素的水平;用FQ-PCR法檢測下丘腦組織中Adp、AdpR1、AdpR2、GnRH和GnIH mRNA的表達。結果顯示:
　　(1)皖南花豬血清脂聯(lián)素與GnRH和GnIH水平均有極顯著的發(fā)育性變化,在30d時脂聯(lián)素極顯著低于其他日齡,而GnRH和GnIH顯著或極顯著高于其他日齡(P<0.05或P<0.01)。
　　(2)皖南花豬下丘腦組織脂聯(lián)素mRNA表達量很低,AdpR1、AdpR2 mRNA在不同發(fā)育階段的表達量相對

4、穩(wěn)定(P>0.05),AdpR1 mRNA表達量在各個日齡均顯著高于AdpR2(P<0.05)。皖南花豬下丘腦組織GnRH、GnIH mRNA發(fā)育性變化總體呈下降趨勢,GnRH、GnIH mRNA在下丘腦中的發(fā)育性變化總體呈下降趨勢,GnRH和GnIH mRNA表達量分別在45d和90d最低。剛出生的母豬下丘腦GnRH mRNA表達量顯著高于其他日齡(P<0.05)。
　　(3)性別間比較發(fā)現(xiàn),公豬AdpR1 mRNA在0d,Ad

5、pR2和GnRH mRNA在30d顯著高于母豬(P<0.05)。
　　(4)相關性分析結果:皖南花豬下丘腦組織中AdpR1與GnRH表達量顯著負相關(P<0.05);血清中Adp與GnRH水平顯著負相關(P<0.05),母豬Adp與GnRH顯著負相關(P<0.05)。GnRH與GnIH含量在公、母豬和總體上均極顯著正相關(P<0.01)。
　　以上結果提示:在皖南花豬發(fā)育過程中脂聯(lián)素可能通過內(nèi)分泌并由AdpR1介導從而抑制G

6、nRH的分泌,而這種抑制主要表現(xiàn)在母豬中。
　　2、體外試驗:脂聯(lián)素對小鼠下丘腦細胞生殖激素基因表達的影響
　　選取懷孕18d的小鼠在無菌條件下取胎鼠下丘腦組織分離培養(yǎng)下丘腦細胞。培養(yǎng)5d后用重組脂聯(lián)素處理,試驗設置4h和24h兩個時間點,每個時間點設置2μg/ml和10μg/ml兩個濃度。FQ-PCR方法檢測下丘腦細胞中AdpR1、AdpR2、GnRH和GnIH mRNA表達量。結果顯示:
　　(1)重組脂聯(lián)素對脂聯(lián)

7、素受體基因表達的影響:2μg/ml的重組脂聯(lián)素處理4h后AdpR2 mRNA表達量極顯著下降(P<0.01),其余均無顯著變化。此外,下丘腦細胞中AdpR1 mRNA表達量顯著高于AdpR2的mRNA表達量(P<0.01);
　　(2)重組脂聯(lián)素對下丘腦GnRH細胞和GnIH細胞中GnRH和GnIH基因表達的影響:下丘腦細胞加入重組脂聯(lián)素24h后,10μg/ml組的GnRH和GnIH mRNA的表達量受到極顯著的抑制(P<0.01