脂聯(lián)素對(duì)皖南花豬性腺發(fā)育的影響.pdf

1、皖南花豬是安徽省優(yōu)良的地方豬種，其優(yōu)良的遺傳品質(zhì)和較強(qiáng)的繁殖性能在中國(guó)豬種中具有明顯的獨(dú)特性。脂肪組織分泌的細(xì)胞因子很多與生殖相關(guān)，而脂聯(lián)素（Adp）作為脂肪組織分泌最多的一種生物活性物質(zhì)，與生殖的關(guān)系十分密切。本試驗(yàn)通過(guò)分析皖南花豬血清中性激素含量的發(fā)育性變化規(guī)律及性腺組織中脂聯(lián)素受體與性腺中性激素合成因子表達(dá)量的發(fā)育性變化規(guī)律與相關(guān)性，探討Adp與皖南花豬生殖作用的聯(lián)系。通過(guò)重組脂聯(lián)素（rAdp）對(duì)豬睪丸間質(zhì)細(xì)胞和卵巢顆粒細(xì)胞的影響

2、，探索Adp對(duì)生殖激素合成的影響及機(jī)制。
　　 1、皖南花豬血清性激素含量的發(fā)育性變化及性腺中相關(guān)基因時(shí)序性表達(dá)
　　 選擇 0d、30d、45d、90d、180d 不同日齡皖南花豬進(jìn)行試驗(yàn)，各日齡樣本數(shù) 10頭（公、母各5頭）。ELISA 法測(cè)定公豬血清中T和母豬血清中E2的水平；RTPCR法檢測(cè)睪丸和卵巢組織中AdpR1、A dpR2、L HR、F SHR、S tAR、C YP11A1、C YP19 mRNA表達(dá)。結(jié)

3、果顯示：
　　 （1）皖南花豬公豬各日齡中血清T濃度有極顯著發(fā)育性變化（P<0.01），表現(xiàn)為0~45d顯著下降，而后維持穩(wěn)定。皖南花豬母豬各個(gè)日齡E2濃度也有極顯著的發(fā)育性變化（P<0.01），整體表現(xiàn)為先降低，再升高，然后趨于穩(wěn)定狀態(tài)。0d與45d母豬血清E2濃度有兩個(gè)峰值，30d、90d和180d差異不顯著。
　　 （2）AdpR1 mRNA在睪丸中的發(fā)育性變化極顯著（P<0.01），AdpR2 mRNA在睪丸中的

4、發(fā)育性變化整體表現(xiàn)為上升趨勢(shì)。A dpR1 mRNA在卵巢中有顯著的發(fā)育性變化（P<0.05），AdpR2 mRNA在卵巢中有極顯著的發(fā)育性變化（P<0.01）。睪丸和卵巢AdpR1 mRNA的表達(dá)量均高于AdpR2 mRNA。
　　 （3）C YP11A1、St AR和LHR mRNA在睪丸中表達(dá)量有顯著的發(fā)育性變化（P<0.01或P<0.05）；F SHR mRNA在卵巢中表現(xiàn)為極顯著的發(fā)育性變化模式（P<0.01），C Y

5、P19mRNA 無(wú)顯著性發(fā)育變化。
　　 （4）相關(guān)性分析結(jié)果：
　　 睪丸組織中AdpR1與CYP11A1 mRNA表達(dá)量顯著相關(guān)（r=0.587，P<0.05）；LHR分別與CYP11A1和StARmRNA表達(dá)量顯著相關(guān)（r=0.528，P＜0.05；r=0.552，P＜0.05）；
　　 CYP11A1與 StARmRNA表達(dá)量極顯著正相關(guān)（r=0.709，P<0.01）。
　　 卵巢組織中AdpR

6、1 mRNA與AdpR2 mRNA 顯著正相關(guān)（r=0.380，P＜0.05）；A dpR1mRNA與 CYP19 mRNA 顯著負(fù)相關(guān)（r=0.472，P<0.05）。
　　 以上結(jié)果表明：
　　 AdpR1 mRNA在睪丸組織的高表達(dá)提示脂聯(lián)素可能通過(guò) AdpR1 介導(dǎo)對(duì)睪丸的調(diào)節(jié)作用，其發(fā)育性變化和CYP11A1 mRNA 呈正相關(guān)，提示脂聯(lián)素對(duì)睪酮的生成有一定的促進(jìn)作用。
　　 卵巢組織中AdpR1 mR

7、NA與CYP19 mRNA的負(fù)相互作用影響卵巢中E2的合成。
　　 AdpR1、AdpR2 mRNA的正相關(guān)，AdpR1 mRNA的高表達(dá)，AdpR1 mRNA與 CYP19mRNA的負(fù)相關(guān)性提示脂聯(lián)素對(duì)卵巢的作用通過(guò)AdpR1 對(duì)卵巢中E2的分泌起抑制作用。
　　 2、脂聯(lián)素對(duì)豬睪丸間質(zhì)細(xì)胞和卵巢顆粒細(xì)胞性激素生成的影響及機(jī)制
　　 選取10d皖南花豬公豬，無(wú)菌條件下取睪丸組織分離培養(yǎng)間質(zhì)細(xì)胞；選取卵巢顆粒細(xì)胞

8、進(jìn)行相關(guān)處理后進(jìn)行增殖培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)兩天后用rAdp處理，12h后ELISA法測(cè)定間質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)液中T和顆粒細(xì)胞培養(yǎng)液中E2的水平；熒光定量實(shí)時(shí)PCR法檢測(cè)睪丸間質(zhì)細(xì)胞和卵巢顆粒細(xì)胞中AdpR1、AdpR2、LHR、FSHR、StAR、CYP11A1、CYP19mRNA表達(dá)量。結(jié)果顯示：
　　 （1）細(xì)胞培養(yǎng)液中T和E2的濃度變化：
　　 2μg/mL rAdp 處理后的睪丸間質(zhì)培養(yǎng)液上清中T 顯著升高（P<0.05），而

9、 CompoundC+2μg/mL Adp 處理后T 濃度有下降趨勢(shì)，但差異不顯著。U0126+2μg/mL rAdp 處理后T 濃度有上升的趨勢(shì)，但差異不顯著。2μg/mL rAdp 處理后的卵巢顆粒細(xì)胞上清液中E2 無(wú)顯著變化。
　　 （2）細(xì)胞中相關(guān)基因表達(dá)量的變化：
　　 睪丸間質(zhì)細(xì)胞：rAdp 能極顯著增加AdpR1 mRNA的表達(dá)量，rAdp 處理后AdpR2mRNA的表達(dá)量有一定上升趨勢(shì)。R Adp 極顯著

10、抑制StARmRNA的表達(dá)；對(duì) CYP11A1mRNA的合成影響不大。此外，rAdp 使AMPK mRNA表達(dá)量極顯著上升。培養(yǎng)液中T的上升與T 合成相關(guān)基因表達(dá)不一致，可能與T 濃度的上升導(dǎo)致睪酮合成的負(fù)反饋機(jī)制的啟動(dòng)有關(guān)。但培養(yǎng)液中T 終濃度的上升提示 Adp 可能通過(guò) AdpR1 作用于睪丸間質(zhì)細(xì)胞，引起 AMPK 途徑的激活，增強(qiáng)T的合成。
　　 卵巢顆粒細(xì)胞：rAdp 對(duì)AdpR1 mRNA表達(dá)量無(wú)影響，而對(duì)AdpR2