逐瘀安腦顆粒對腦出血大鼠腦水腫及鐵離子含量影響的研究

1、<p>　　學校代碼：10600 學 號：20062028</p><p>　　廣 西 中 醫(yī) 學 院</p><p>　　碩 士 學 位 論 文</p><p>　　逐瘀安腦顆粒對腦出血大鼠腦水腫及</p><p>　　鐵離子含量影響的研究</p><p>　　研 究 生： 張其瑞</p>&

2、lt;p>　　導 師： 吳林 副教授</p><p>　　院系（部所）： 第一臨床醫(yī)學院</p><p>　　專 業(yè)： 中醫(yī)內科學</p><p>　　研 究 方 向 ： 腦血管病的防治及中西</p><p><b>　　醫(yī)結合康復規(guī)范研究</b></p><p>　　完 成 日 期 ： 2

3、009年 5月 23日</p><p><b>　　目 錄</b></p><p>　　中 文 摘 要 ······················&

4、#183;····························1</p><p>　　英 文 摘 要 ··

5、83;····································&

6、#183;···········3</p><p>　　引 言 ····················&

7、#183;·······························5</p><p>　　正 文 &

8、#183;····································

9、;···············7</p><p>　　實 驗 材 料 與 方 法 ···············&

10、#183;·························7</p><p>　　實驗材料······&

11、#183;····································

12、;······7</p><p>　　實驗動物 ·························

13、3;···················7</p><p>　　動物飼養(yǎng)條件············&#

14、183;······························7</p><p>　　主要試劑和藥品·

15、;····································

16、83;···7</p><p>　　實驗儀器····························

17、83;···················7</p><p>　　實驗方法············

18、83;····································&

19、#183;7</p><p>　　模型制備·······························&

20、#183;················7</p><p>　　分組與給藥···············

21、·······························8</p><p>　　觀察指標·

22、····································

23、3;··········8</p><p>　　統(tǒng)計方法·····················

24、3;··························9</p><p>　　實 驗 結 果 ·····

25、····································

26、3;·····9</p><p>　　討 論 ··························

27、3;·····················13</p><p>　　存 在 的 問 題 和 展 望 ········

28、83;·····························27</p><p>　　結 論 ··&#

29、183;····································

30、···········28</p><p>　　參 考 文 獻 ····················&

31、#183;·····························29</p><p>　　附 錄 1··

32、;····································

33、83;·············35</p><p>　　附 錄 2··················&

34、#183;·································36</p><

35、;p>　　綜 述 ··································

36、3;···············37</p><p>　　致 謝 ················

37、83;·································48</p><p

38、><b>　　1</b></p><p>　　攻 讀 學 位 期 間 發(fā) 表 的 學 術 論 文 目 錄 ·······················49&

39、lt;/p><p>　　作 者 聲 明 ·······························

40、3;··················50</p><p>　　個 人 簡 歷 ·············

41、;····································

42、83;51</p><p><b>　　2</b></p><p><b>　　中 文 摘 要</b></p><p>　　目 的 ： 觀察逐瘀安腦顆粒對腦出血大鼠腦組織含水量和鐵離子含量</p><p>　　的影響，分析其抗腦水腫的作用機制，為該藥的臨床應用提供科學依據(jù)。</p>&

43、lt;p>　　方 法 ：將90只大鼠隨機分成3組：假手術組、逐瘀安腦顆粒組和尼莫</p><p>　　地平組，其中假手術組10只，逐瘀安腦顆粒組和尼莫地平組各40只。每</p><p>　　個組再分成6h、1d、3d和7d四個時間小組，每個時間小組10只大鼠。其</p><p>　　中假手術組不進行造模；逐瘀安腦顆粒組和尼莫地平組采用自體半凝血</p&g

44、t;<p>　　定向注入法制造腦出血模型，造模后6h予相應藥物灌胃一次，以后每天</p><p>　　灌胃一次，直到相應時點。按體表面積與劑量換算法計算出大鼠的給藥</p><p>　　劑量，逐瘀安腦顆粒組每次每只2g/100g體重，尼莫地平組每次每只</p><p>　　12mg/100g體重。各組在造模后按照Longa的5分法進行神經(jīng)功能行為學評&

45、lt;/p><p>　　分，1～3分的大鼠入選本實驗，不夠標準者拋棄，重新制模補充入組。</p><p>　　四個時間小組在各自對應的時間點進行神經(jīng)功能評分，然后處死取腦組</p><p>　　織分別測腦含水量和鐵離子含量。</p><p>　　結 果 ： 1.實驗結果顯示，逐瘀安腦顆粒組與尼莫地平組動物清醒后</p><p&

46、gt;　　即有明顯的偏癱體征, 表現(xiàn)為提尾后左前肢屈曲、動物向左轉圈、向左側</p><p>　　傾倒等, 術后6h神經(jīng)功能缺損明顯, 1d達到高峰, 3d后偏癱體征改善, 逐</p><p>　　瘀安腦顆粒組與尼莫地平組比較, 神經(jīng)功能缺損評分雖然有所改善, 但</p><p>　　差異無顯著性意義(P>0.05)；2. 與假手術組相比，尼莫地平組6h后腦含

47、水</p><p>　　量增加(P<0.05), 1d后明顯增加(P<0.01), 3d時達到高峰, 7d后明顯下降, 與</p><p>　　假手術組比較, 差異仍有顯著性意義(P<0.05)。在相同的時間點, 逐瘀安</p><p>　　腦 顆 粒 組 腦 含 水 量 比 尼 莫 地 平 組 明 顯 減 少 , 差 異 有 顯 著 性 意 義&

48、lt;/p><p>　　(P<0.05,P<0.01); 3. 與假手術組相比，尼莫地平組6h后腦組織鐵離子含量</p><p>　　增加(P<0.05), 1d后明顯增加(P<0.01), 3d時達到高峰, 7d后下降, 與假手術</p><p>　　組比較, 差異仍有顯著性意義(P<0.01)。在出血6h、1d時，逐瘀安腦顆粒</

49、p><p>　　組與尼莫地平組大鼠腦組織鐵離子含量無明顯差異，在3d和7d時間點上,</p><p>　　逐瘀安腦顆粒組腦組織鐵離子含量比尼莫地平組明顯少, 差異有顯著性</p><p><b>　　1</b></p><p>　　意義(P<0.01)。</p><p>　　結 論 ： 逐瘀安腦

50、顆粒能減少腦出血大鼠出血后腦組織的含水量，并</p><p>　　能降低腦組織鐵離子含量，其作用機制可能是通過降低腦組織鐵離子含</p><p>　　量而減輕腦水腫，從而對腦出血后神經(jīng)功能的恢復起到一定作用。</p><p>　　關鍵詞：逐瘀安腦顆粒；腦出血；腦水腫；鐵離子</p><p><b>　　2</b><

51、/p><p><b>　　TITLE</b></p><p>　　The effects of Zhuyu Annao Granule on brain edema and the</p><p>　　iron ions after intracerebral hemorrhage in rat</p><p><b&

52、gt;　　ABSTRACT</b></p><p>　　Objective: To investigate the effects of Zhuyu Annao Granule on brain</p><p>　　edema and the iron ions after intracerebral hemorrhage in rat. Analysis the</p&

53、gt;<p>　　mechanism of its anti-brain edema, which can provide modern scientific proof</p><p>　　of its clinical application.</p><p>　　Methods: To randomly divide 90 rats into three groups:

54、 control group,</p><p>　　Zhuyu Annao Granule group and Nimodipine group. 10 rats in control group;</p><p>　　40 cases in Zhuyu Annao Granule group and 40 cases in Nimodipine group.</p><

55、;p>　　Each group was divided into 6h, 1d, 3d and 7d four time groups, each time</p><p>　　group have 10 rats. The control group were treated by nothing; 40 cases in</p><p>　　Zhuyu Annao Granule

56、 group, which were treated by Zhuyu Annao Granule;</p><p>　　40 cases in Nimodipine group. The intracerebral hemorrhage models were</p><p>　　established by autologous blood injection method in th

57、e Zhuyu Annao</p><p>　　Granule and nimodipine groups. 6 hours and each day after the models were</p><p>　　established the rats were administrated by corresponding drugs until the</p><

58、p>　　corresponding time. According to the body surface area and dose conversion</p><p>　　method to calculate the dose in rats. In Zhuyu Annao Granule group, Zhuyu</p><p>　　Annao Granule(2g/100

59、g, ip) was administrated. In Nimodipine group,</p><p>　　Nimodipine(12mg/100g, ip) was administrated. The behavior score was</p><p>　　measured according to Longa’s method. Rats were killed at the

60、 scheduled</p><p>　　time. The changes of brain water and the iron ions content were measured.</p><p>　　Results: The results showed that the rats were obviously hemiplegia</p><p><

61、;b>　　3</b></p><p>　　after the model established. There were no significant differences between</p><p>　　the Zhuyu Annao Granule and the Nimodipine group(P>0.05) on</p><p&g

62、t;　　neurological deficit. The cerebral water content of Nimodipine group were</p><p>　　significant decreased compared with the control group(P<0.05). And the</p><p>　　cerebral water content o

63、f the Zhuyu Annao Granule group were significant</p><p>　　decreased compared with the Nimodipine group(P<0.05,P<0.01). Compared</p><p>　　with the control group, the iron ions content were

64、significant decreased in</p><p>　　Zhuyu Annao Granule and Nimodipine group (P<0.01). At the 6h and 1d</p><p>　　time point, there were no significant differences between the Zhuyu Annao</p&

65、gt;<p>　　Granule and the Nimodipine group. But at 3d and 7d time point, there were</p><p>　　significant differences between the Zhuyu Annao Granule and the</p><p>　　Nimodipine group(P<

66、0.01).</p><p>　　Conclusion: Zhuyu Annao Granule can reduce the cerebral water</p><p>　　content and the iron ions content in intracerebral hemorrhage rats. Its</p><p>　　mechanism is

67、possibly through reduces the cerebral iron ion content to reduce</p><p>　　the brain edema and play a role in neurological function recovery.</p><p>　　Key word： Zhuyu Annao Granule; Intracerebral

68、 hemorrhage; Cerebral</p><p>　　edema; Iron ions</p><p><b>　　4</b></p><p><b>　　引 言</b></p><p>　　腦出血（intracerebral hemorrhage, ICH)后腦水腫的形成是腦出血最為&l

69、t;/p><p>　　重要的病理改變, 也是導致臨床腦出血病情惡化的關鍵因素[1]。Zazulia</p><p>　　等[2]對自發(fā)性腦出血（spontaneous intracerebral hemorrhage, SCH）患者進</p><p>　　行了隨訪, 認為 SCH 發(fā)病 48h 之內患者病情惡化主要是血腫增大所致,</p><p>

70、;　　而在 48h 之后則主要是腦水腫所致。</p><p>　　目前，現(xiàn)代醫(yī)學對腦出血后腦水腫的研究不斷深入，其對本病的認</p><p>　　識也逐步提高，但在治療方面，主要是應用脫水劑。由于西藥存在一定</p><p>　　的副作用，中醫(yī)中藥就有進一步深入研究的必要性和緊迫性。逐瘀安腦</p><p>　　顆粒是以廣西名老中醫(yī)吳子輝主任

71、醫(yī)師治療腦出血的名方逐瘀安腦丸</p><p>　?。ㄋ?、土鱉蟲、地龍、桃仁、凌霄花、澤蘭、酒大黃、川芎、豬苓、</p><p>　　澤瀉等）為基礎，利用中藥配方顆粒組方而成。該方針對出血后水腫的“瘀</p><p>　　血阻滯，水毒潴留”之病機，采用活血化瘀、祛除水毒的方法來治療出血</p><p><b>　　后水腫。<

72、/b></p><p>　　本研究用自體血注入法制造腦出血模型，觀察逐瘀安腦顆粒對腦組</p><p>　　織鐵離子含量的影響，來探討其治療出血后腦水腫的可能作用機制。為</p><p>　　逐瘀安腦顆粒在腦病領域的應用提供更多可靠的實驗和理論依據(jù)。將對</p><p>　　受腦出血后腦水腫病困擾日益嚴重的我國老齡化社會具有重要的社會經(jīng)

73、</p><p><b>　　濟意義。</b></p><p><b>　　5</b></p><p><b>　　6</b></p><p><b>　　正 文</b></p><p>　　1 實 驗 材 料 和 方 法</

74、p><p><b>　　實 驗 材 料</b></p><p><b>　　實 驗 動 物</b></p><p>　　wistar 大鼠 90 只，雌雄各半，體重 280～350g（廣西藥品檢驗所實</p><p>　　驗動物中心提供,許可證號 SCXK 桂 2003-0001）。</p>

75、<p>　　動 物 飼 養(yǎng) 條 件</p><p>　　專用飼養(yǎng)室，調節(jié)環(huán)境溫度：23-25℃，相對濕度：50-60%。懸掛</p><p>　　式金屬網(wǎng)籠具分籠飼養(yǎng)，每籠 5 只。動物自由飲水、攝食。</p><p>　　主 要 試 劑 和 藥 品</p><p>　?、僦痧霭材X顆粒：由江蘇江陰天江藥業(yè)有限公司提供中藥配方顆&

76、lt;/p><p><b>　　粒。</b></p><p>　　②尼莫地平片：由正大青春寶藥業(yè)有限公司生產，每片 20 mg，生</p><p>　　產批號：0612003。</p><p>　　③戊巴比妥鈉：由中國醫(yī)藥（集團）上?；瘜W試劑公司生產，25g</p><p>　?。浚枺篎2006

77、0903, SCRC69060125。</p><p><b>　　實 驗 儀 器</b></p><p>　?、貯R2140 型電子分析天平，奧豪斯（上海）公司生產。</p><p>　　②101－1 型電熱恒溫鼓風干燥箱，上海躍進醫(yī)療器械廠生產。</p><p>　?、跾T-4ND 立體定位儀，成都儀器廠生產。<

78、;/p><p>　?、躍OLAAR-M6 原子吸收分光光度計,美國熱電公司生產。</p><p>　　⑤手術器械：手術刀、手術剪、眼科剪、眼科鑷、手術鑷、止血鉗、</p><p>　　持針鉗、動脈夾、縫針、醫(yī)用絲線（黑色 0 號，上海浦東金環(huán)醫(yī)療用品</p><p>　　有限公司，批號：12E081）。</p><p>&

79、lt;b>　　實 驗 方 法</b></p><p><b>　　模 型 制 備</b></p><p><b>　　7</b></p><p>　　用 5%戊巴比妥鈉 40mg/kg 腹腔注射麻醉大鼠，常規(guī)備皮、消毒。頭</p><p>　　背側皮膚正中切一長約 1cm 的縱形切

80、口，充分暴露顱骨。按《大鼠腦立</p><p>　　體定位圖譜》（諸葛啟釧譯，第 3 版，人民衛(wèi)生出版社），于大鼠顱骨背</p><p>　　側前鹵前 0.2mm，向右旁開 3mm，開顱鉆一直徑約 1.0mm 小孔，45℃熱</p><p>　　水浸泡尾部 2min，距尾尖 0.5cm 處剪尾，取 50µl 血，待其呈半凝狀態(tài)，</p>&l

81、t;p>　　用 16 號針頭由鉆孔刺入 6mm（即右側尾狀核部位）將半凝血緩慢注入，</p><p>　　留針 10min，緩慢拔針，以防帶出血塊，然后用醫(yī)用骨蠟封口，縫合頭皮。</p><p><b>　　分 組 與 給 藥</b></p><p>　　將 90 只大鼠隨機分成假手術組、逐瘀安腦顆粒組和尼莫地平組，其</p>

82、<p>　　中假手術組 10 只，逐瘀安腦顆粒組和尼莫地平組各 40 只。逐瘀安腦顆</p><p>　　粒組和尼莫地平組每個組再分成 6h、1d、3d 和 7d 四個時間點，每個時</p><p>　　間點 10 只大鼠。其中假手術組不進行造模，也不予藥物處理；逐瘀安腦</p><p>　　顆粒組造模成功后每天上午給藥一次，予逐瘀安腦顆粒灌胃。尼莫地

83、平</p><p>　　組造模后每天上午給藥一次，予尼莫地平灌胃，直到相應時點。其中逐</p><p>　　瘀安腦顆粒按 2g／100g 體重給藥，用蒸餾水制成混懸液 2ml；尼莫地平</p><p>　　每天上午給藥一次，按 12mg／100g 體重給藥，用蒸餾水制成混懸液 2ml。</p><p><b>　　觀 察 指 標 ：

84、</b></p><p>　　神 經(jīng) 功 能 缺 損 評 分 測 定</p><p>　　神經(jīng)功能行為學評分按照 Longa[3]的 5 分法進行神經(jīng)功能行為學評</p><p>　　分。0 分：無神經(jīng)缺損癥狀；1 分：左前肢不能完全伸直；2 分：向左旋</p><p>　　轉；3 分：向左側傾倒；4 分：不能行走或昏迷。分數(shù)越高

85、,神經(jīng)功能障礙</p><p>　　越嚴重。1 分～3 分的大鼠入選本實驗，不夠標準者拋棄，重新制模補充</p><p>　　入組。其中１分的有 26 只，2 分的有 30 只，3 分的 24 只。</p><p>　　腦 組 織 含 水 量 測 定</p><p>　　分別于術后 6h、1d、3d、7d 斷頭取腦，距離針道前后 1.5 mm

86、 冠狀</p><p>　　切取腦組織約 0.5g 左右，用電子天平稱取濕重后，臵于 95℃恒溫干燥箱</p><p>　　內 24 h 干燥后再稱取干重(精確到 0.1 mg)。腦含水量(%)=(濕重－干重)</p><p><b>　　8</b></p><p><b>　?。瘽裰?#215;100%。&l

87、t;/b></p><p>　　腦 組 織 Fe2+含 量 測 定</p><p>　　取測干濕重后的干腦組織 0. 1g,先后加入濃硝酸（16mol／L）5ml 和</p><p>　　高氯酸（12mol／L）0.5ml，25℃封閉消化 12h, 將酸蒸發(fā)再用去離子水</p><p>　　定容后，在原子吸收分光光度儀上測定樣品中 Fe

88、2</p><p>　?。暮? 根據(jù)標準曲線</p><p><b>　　得出分析結果。</b></p><p><b>　　統(tǒng) 計 方 法</b></p><p>　　運用華西醫(yī)科大學衛(wèi)生統(tǒng)計學教研室提供的 PEMS3.1 軟件包。計量</p><p>　　資料以（x&

89、#177;s)表示，采用方差分析，p<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。</p><p><b>　　實 驗 結 果</b></p><p>　　各 組 大 鼠 腦 出 血 后 神 經(jīng) 功 能 障 礙 評 分 （ 表 1）</p><p>　　逐瘀安腦顆粒組與尼莫地平組動物清醒后即有明顯的偏癱體征, 表</p><p>

90、　　現(xiàn)為提尾后左前肢屈曲、動物向左轉圈、向左側傾倒，術后 6 h 神經(jīng)功能</p><p>　　缺損明顯，1d 達到高峰，3d 后偏癱體征改善，逐瘀安腦顆粒組與尼莫地</p><p>　　平組比較，神經(jīng)功能缺損評分雖然有所改善，但差異無顯著性意義(P>0.05,</p><p><b>　　表 1)。</b></p><

91、;p>　　表 1 各組大鼠神經(jīng)功能缺損評分比較(分,x±s)</p><p><b>　　術后時間</b></p><p><b>　　組別 n</b></p><p>　　6h 1d 3d 7d</p><p>　　假手術組 10 0 0 0 0</p><p&

92、gt;　　逐瘀安腦顆粒組 10 2.29±0.61* 2.57±0.63* 1.33±0.66* 1.02±0.60*</p><p>　　尼莫地平組 10 2.30±0.65* 2.58±0.71* 1.66±0.67* 1.18±0.61*</p><p>　　注：與假手術組比較，* p<0.01&l

93、t;/p><p><b>　　9</b></p><p>　　圖 1 各組大鼠神經(jīng)功能缺損評分比較(分,x±s)</p><p>　　血 腫 周 圍 腦 組 織 含 水 量 變 化 (表 2)</p><p>　　逐瘀安腦顆粒組和尼莫地平組 6 h 后腦含水量增加(P<0.05), 1d 后明</p&g

94、t;<p>　　顯增加(P<0.01)，3d 時達到高峰，7d 后明顯下降, 與假手術組比較, 差異</p><p>　　有顯著性意義(P<0.05)。在造模后 6h，逐瘀安腦顆粒組腦含水量與尼莫地</p><p>　　平組相比無明顯差異，在造模后 1d、3d 和 7d 時逐瘀安腦顆粒組腦含水</p><p>　　量與尼莫地平組相比差異有顯

95、著性意義(P<0.05, P<0.01)。說明逐瘀安腦</p><p>　　顆粒對腦水腫有一定治療作用。</p><p>　　表 2 各組大鼠腦含水量比較(%,x±s)</p><p><b>　　術后時間</b></p><p><b>　　組別 n</b></p>

96、;<p>　　6h 1d 3d 7d</p><p>　　假手術組 10 77.12±0.61 77.12±0.61 77.12±0.61 77.12±0.61</p><p>　　逐瘀安腦顆粒組 10 78.12±0.36* 79.48±0.24## 81.02±0.83## 78.78±0.4

97、5#</p><p>　　尼莫地平組 10 78.15±0.46* 80.25±0.80** 83.82±0.49** 79.12±0.71*</p><p>　　注:與假手術組比較, *P< 0.05, **P<0.01; 與尼莫地平組比較, #P< 0.05, ##P<0.01</p><p>&l

98、t;b>　　10</b></p><p>　　圖 2 各組大鼠腦含水量比較(%,x±s)</p><p>　　腦 組 織 鐵 離 子 含 量 變 化 （ 表 3）</p><p>　　尼莫地平組 6 h 后腦組織鐵離子含量增加(P<0.05)，1d 后明顯增加</p><p>　　(P<0.01)，3d

99、 時達到高峰，7d 后下降，與假手術組比較，差異仍有顯著</p><p>　　性意義(P<0.01)。在出血 6h、1d 時，逐瘀安腦顆粒組與尼莫地平組大鼠</p><p>　　腦組織鐵離子含量無明顯差異，在 3d 和 7d 時間點上，逐瘀安腦顆粒組</p><p>　　腦組織鐵離子含量比尼莫地平組明顯減少，差異有顯著性意義(P<0.05,</p&

100、gt;<p>　　P<0.01, 表 3)</p><p>　　表 3 各組大鼠腦組織鐵離子含量比較(mg／kg,x±s)</p><p>　　假手術組 10 21.9±2.42 21.9±2.42 21.9±2.42 21.9±2.42</p><p>　　逐瘀安腦顆粒組 10 30.2

101、7;1.23 39.3±2.013 47.5±3.51## 25.7±3.12##</p><p>　　尼莫地平組 10 31.6±4.61* 39.5±2.53** 66.2±3.75** 45.6±3.51**</p><p>　　注:與假手術組比較, *P< 0.05, **P<0.01; 與尼莫地平組

102、比較, #P< 0.05, ##P<0.01</p><p><b>　　11</b></p><p>　　圖 3 各組大鼠腦組織鐵離子含量比較(mg／kg, x±s)</p><p>　　鐵 離 子 與 腦 組 織 含 水 量 之 間 的 相 關 性 分 析</p><p>　　圖 4 逐瘀安腦顆

103、粒組含水量與鐵離子含量相關性分析</p><p><b>　　12</b></p><p>　　圖 5 尼莫地平組含水量與鐵離子含量相關性分析</p><p>　　直線相關分析顯示: 逐瘀安腦顆粒組在腦出血后不同時間點腦組織</p><p>　　鐵離子含量變化 與腦含水量 變化直 線相關分析呈正 相關 (r=0.901,

104、</p><p>　　P<0.05)；尼莫地平組在腦出血后不同時間點腦組織鐵離子含量與含水量</p><p>　　變化的直線相關分析呈正相關(r=0.935, P<0.05)；從結果可以得出，腦組</p><p>　　織鐵離子含量與含水量之間呈正相關，腦組織鐵離子含量的多少可以反</p><p>　　映腦組織水腫的程度。</

105、p><p><b>　　討 論</b></p><p>　　我國腦出血的發(fā)病率約 100/10 萬人，占全部腦血管疾病的 35%，男</p><p>　　性患者病死率達 48.3％，女性患者病死率達 50.8％[4]，幸存者嚴重致殘</p><p>　　率也較高，是威脅中老年人健康的主要疾病之一。</p>&l

106、t;p>　　腦出血后腦水腫的形成是腦出血最為重要的病理改變，也是導致臨</p><p>　　床腦出血病情惡化的關鍵因素[1]。近年來的研究表明，鐵離子介導的氧化</p><p>　　損傷和細胞凋亡在腦出血繼發(fā)性腦損傷機制中起重要作用[5]。本研究旨在</p><p>　　通過觀察逐瘀安腦顆粒對腦出血大鼠腦組織含水量和鐵離子含量的影</p><

107、;p><b>　　13</b></p><p>　　響，進一步探討其抗腦水腫的作用機制，為該藥的臨床應用提供科學依</p><p>　　據(jù)。下面就我們的實驗發(fā)現(xiàn)及其相關問題進行討論。</p><p>　　實 驗 模 型 的 選 擇</p><p>　　實 驗 動 物 的 選 擇</p><p&g

108、t;　　腦出血的實驗研究始于 20 世紀 60 年代, 先后建立了自體血注入的</p><p>　　狗、猴、兔、貓和大鼠等動物模型。目前的研究以大鼠最為常用[6~8], 因</p><p>　　其具有以下優(yōu)點: ①大鼠價格低廉, 且容易管理和實驗性手術; ②大鼠腦</p><p>　　體積較小, 易于腦組織病理變化和生化改變的觀察[9]; ③大鼠腦血管解剖</

109、p><p>　　及生理較接近人類; ④已積累大量成熟的關于大鼠生理、生化、藥理、形</p><p>　　態(tài)學等方面的實驗資料?；谝陨显?，我們采用大鼠作為實驗動物。</p><p>　　實 驗 模 型 的 制 備 方 法</p><p>　　腦出血模型在腦出血實驗研究中的作用是關鍵性的。自 1974 年</p><p>

110、　　Sussman 用自體靜脈血注入法制做狗額葉腦出血模型以來[10], 腦出血動</p><p>　　物模型的研究已經(jīng)獲得了長足的進步。大鼠腦尾狀核是腦內最大核團，</p><p>　　易于立體定位，而且尾狀核屬基底節(jié), 是人類高血壓腦出血最好發(fā)部位，</p><p>　　所以大鼠腦出血模型中多定位于鼠腦尾狀核。目前常用的實驗性腦出血</p><

111、;p>　　模型有以下 4 種：①自體血注入法；②膠原酶誘導法；③微球囊充脹法；</p><p><b>　?、茏园l(fā)性腦出血。</b></p><p>　　自 體 血 注 入 法</p><p>　　自體血注入的血腫制備有 3 種方法[11]：①開顱后直視下腦內注血；</p><p>　?、诎唇馄识ㄎ汇@孔注血；③立體

112、定向注血。</p><p>　　自體血注入腦出血模型不僅可以通過控制注血量做分級實驗性腦出</p><p>　　血研究，而且因為是非肝素化自體血，可觀察血液凝固過程中血管活性</p><p>　　物質釋放對腦循環(huán)及腦組織的影響[12]，因而較接近臨床腦出血，適合研</p><p>　　究腦實質出血的自然過程、病理形態(tài)學等特點，可更好地觀察凝固

113、過程</p><p>　　中各種因子對腦組織代謝和血流的影響，從而為臨床治療提供依據(jù)。如</p><p>　　果注血速度稍快，血液往往順針道溢出，進入蛛網(wǎng)膜下腔和硬腦膜下腔，</p><p><b>　　14</b></p><p>　　且易破入腦室。為了解決這一問題，注射完成后，針頭不要立即拔除，</p>

114、<p>　　應在原地停留 5~10 min，等局部血液凝固后，再緩慢拔除針頭，成功率</p><p>　　較高[13]。呂田明等[14]報道注射凝固自體動脈血，以控制血液沿針道返流。</p><p>　　膠 原 酶 誘 導 法</p><p>　　Rosenberg 等[15]于 1990 年創(chuàng)造性地建立了膠原酶誘導腦出血模型，</p>&

115、lt;p>　　這一方法已被廣泛采用。這種模型制作方法簡單，快捷且重復性好，與</p><p>　　人類腦出血病理、生化和病理生理學有許多相似性[16]。廖群紛[17]等用注</p><p>　　射用膠原酶－肝素誘導法制作大鼠腦出血模型，取得了良好的效果。王</p><p>　　振忠[18]等通過用不同劑量膠原酶Ⅳ尾殼核內注射建立重度出血性腦卒中</p&g

116、t;<p>　　大鼠模型，研究發(fā)現(xiàn)Ⅳ型膠原酶 0.75U 尾殼核內注射可以誘導建立穩(wěn)定</p><p>　　的重度出血性腦卒中大鼠模型，該模型肢體功能缺損明顯，存活率高，</p><p>　　能作為促進出血性腦卒中大鼠神經(jīng)功能恢復研究的可靠應用平臺。但與</p><p>　　急性腦出血相比，血腫形成時間長，且出血為一彌漫性滲血與腦組織混</p&g

117、t;<p>　　合在一起，病理上類似于出血性梗死，這是本模型的不足之處。</p><p>　　微 氣 囊 充 脹 法</p><p>　　Sinar 等[19]用微氣囊方式模擬腦出血，是一種純機械性的腦出血模型。</p><p>　　這種方法能產生一致的、可重復的腦損害。但自發(fā)性腦出血損害，并非</p><p>　　是單一的占位

118、效應，還有來自血腫的血管活性物質釋放所引起的作用[20]。</p><p>　　由于該種模型無血管活性因子的作用，占位灶周圍缺血性損傷明顯輕于</p><p>　　前兩種類型，顯然這種機械性損傷與實際腦出血病理生理和組織學改變</p><p>　　相差甚遠。盡管這種模型制作方法簡單、易操作、重復性好且無注入自</p><p>　　體血模型的諸

119、多弊端，但由于其與臨床脫節(jié)太多，除用于腦出血血腫清</p><p>　　除方面的研究外，較少應用。</p><p>　　自 發(fā) 性 腦 出 血 模 型</p><p>　　自發(fā)性腦出血模型主要有兩種：一種是應用遺傳方式獲得的自發(fā)性</p><p>　　高血壓大鼠(spontaneously hypertensive rats，SHR)。另一種

120、是腎性高血壓</p><p>　　大鼠。兩種方法相比，前者不足之處為遺傳局限性強、易變種或斷種、</p><p><b>　　15</b></p><p>　　難以飼養(yǎng)、價格昂貴、來源困難，盡管與臨床腦出血的病理生理接近，</p><p>　　但由于其遺傳性血管損害以及模型的不穩(wěn)定性、所需時間的不確定性、</p&g

121、t;<p>　　病灶大小的易變性以及模型的不可比性，使其應用大大受限。后者無遺</p><p>　　傳性血管損害，而且血管損害與人類高血壓動脈硬化相似,同樣由于腦出</p><p>　　血的發(fā)生率不可靠、出血量與部位的不穩(wěn)定及模型之間無可比性而使其</p><p><b>　　應用受到限制。</b></p><

122、p>　　以上幾種實驗性腦出血動物模型各有特點，研究者應根據(jù)實驗目的</p><p>　　及研究方向做出相應選擇。基于自體血注入法有以下特點：應用了非肝</p><p>　　素化自體血，較接近人類腦出血，而且操作簡單，可造成各種部位的腦</p><p>　　出血，適合研究腦出血自然過程和病理形態(tài)學特點，可更好地觀察凝固</p><p>　

123、　過程中各種因子對腦組織代謝和血流的影響等優(yōu)點。我們在實驗中選擇</p><p>　　自體血注入法制作大鼠腦出血模型來觀察逐瘀安腦顆粒對腦出血后大鼠</p><p><b>　　的抗腦水腫作用。</b></p><p>　　現(xiàn) 代 醫(yī) 學 對 腦 出 血 后 水 腫 形 成 機 制 的 認 識</p><p>　　腦出血

124、后腦水腫的形成是腦出血最為重要的病理改變，也是導致臨</p><p>　　床腦出血病情惡化的關鍵因素[21]。腦水腫從總體上可分為血管源性腦水</p><p>　　腫和細胞毒性腦水腫。血管源性腦水腫最為常見，是血管通透性增加的</p><p>　　結果，當毛細血管內皮細胞受損，血腦屏障發(fā)生障礙時，或新生毛細血</p><p>　　管尚未建立血

125、腦屏障時，血液中的液體大量滲入細胞外間隙，引起腦水</p><p>　　腫。細胞毒性腦水腫多見于缺血或中毒引起的細胞損害。由于細胞膜的</p><p>　　鈉－鉀依賴性 ATP 酶失活，細胞內水、鈉潴留，引起細胞（神經(jīng)細胞、</p><p>　　膠質細胞、內皮細胞）腫脹，細胞外間隙減小。腦出血后水腫是細胞毒</p><p>　　性水腫和血管源

126、性水腫的共同結果，隨著時間的推移至少經(jīng)歷 3 個階段：</p><p>　　超早期（6h 內）水腫是流體靜壓力和血凝塊回縮所致；第 2 階段（2d 內）</p><p>　　水腫涉及凝血級聯(lián)反應和凝血酶的作用；第 3 階段（3d 及以后）水腫主</p><p>　　要是紅細胞溶解和血紅蛋白釋放的結果[22]。</p><p>　　目前，人們對

127、于水腫的前兩個階段機制的認識基本上是一致的，但</p><p><b>　　16</b></p><p>　　對于第 3 階段，也就是遲發(fā)性腦水腫的機制的認識主要有以下幾方面：</p><p>　　腦 出 血 后 腦 鐵 離 子 代 謝 的 變 化</p><p>　　腦內鐵分布廣泛,但主要存在于大腦白質。而紅核、黑質、

128、蒼白球和</p><p>　　齒狀核等濃度亦較高，基底神經(jīng)節(jié)中含量最高，大腦皮層和小腦鐵相對</p><p><b>　　較少。</b></p><p>　　紅細胞是血液中含量最多的血細胞，其主要成分是血紅蛋白（HB）。</p><p>　　腦出血后鐵離子的產生主要來自兩個方面：一方面大量的 HB 從裂解的</p&

129、gt;<p>　　紅細胞中釋放后生成血紅素和珠蛋白，前者在血紅素氧化酶 (heme</p><p>　　oxygenase, HO) -1 作用下分解為 CO、Fe2+和膽紅素；另一方面腦出血后</p><p>　　血腦屏障破壞，通透性增加，高濃度的血漿鐵蛋白或其它非運鐵蛋白鐵</p><p>　　通過破壞的血腦屏障進入到富含脂質的神經(jīng)元的周圍環(huán)境中,

130、 引起鐵離</p><p><b>　　子異常積聚。</b></p><p>　　文獻報道局部鐵離子急劇增多可通過多種途徑致腦組織損傷。（1）</p><p>　　Fe3+可通過 Fenton 反應產生過多氧自由基，后者攻擊 DNA 并引起腦氧化</p><p>　　損傷[5]。鐵離子易通過接受或失去 1 個電子改變氧化

131、狀態(tài)，具有促進氧化</p><p>　　應激的作用。體內正常代謝和非正常代謝產生的超氧陰離子(O2</p><p><b>　?。?是反應</b></p><p>　　性低的物質，但是在鐵離子的參與下通過 Fenton 反應，可轉化成反應性</p><p>　　強得多的羥自由基(OH〃)。Fenton 反應可概括這一過程

132、：Fe3++O2</p><p><b>　?。?lt;/b></p><p>　　Fe2++O2－，F(xiàn)e2++H2O2 →Fe3++ OH〃+ OH</p><p>　　－。氧自由基可造成生物分子（核</p><p>　　酸、蛋白質、脂質）的氧化損傷，繼而引起細胞結構破壞和功能代謝障</p><p>

133、;　　礙 。Avqul[23] 發(fā)現(xiàn) 出 血 性 卒中 患 者 血 漿抗 氧 化 劑超 氧 化 物歧 化 酶</p><p>　　(superoxide dismutase, SOD) 和 總 超 氧 化 物 清 除 力 （ total superoxide</p><p>　　scavenger activities, TSSA）明顯降低，而氧化劑 NO 水平顯著升高，提示</p&

134、gt;<p>　　自由基在腦出血后腦損傷起一定作用。而 Nakamura T 等[24]的研究證實自</p><p>　　由基清除劑依達拉奉能減低腦出血后鐵和凝血酶誘導的腦損傷。（2）鐵</p><p>　　有直接毒性作用，能與細胞內的有機化合物結合，產生高反應鐵或高鐵</p><p>　　離子，損傷溶酶體膜和線粒體膜,導致細胞損傷和死亡。（3）腦出血

135、后鐵</p><p><b>　　17</b></p><p>　　離子引發(fā)的氧化應激可能通過影響水通道蛋白-4（aquaporin，AQP-4）表</p><p>　　達而加重腦水腫。作為調控中樞神經(jīng)系統(tǒng)水轉運及離子平衡的關鍵因子，</p><p>　　AQP-4 在腦出血后腦水腫的形成中起重要的作用。王改青[25]等

136、的研究發(fā)</p><p>　　現(xiàn)應用去鐵胺可使 ICH 大鼠 AQP-4 mRNA 表達降低，AQP-4 蛋白表達與</p><p>　　AQP-4 mRNA 表達呈正相關。(4)完整轉鐵蛋白和凝血酶(thrombase)相互</p><p>　　作用可引起腦損傷。Nakamura D[26]通過分別給大鼠基底節(jié)注入完整轉鐵</p><p>

137、　　蛋白、不帶鐵的轉鐵蛋白、凝血酶以及轉鐵蛋白和凝血酶混合物，發(fā)現(xiàn)</p><p>　　只有后者能引起基底節(jié)腦水腫，DNA 損傷和細胞內鐵積聚。這提示凝血</p><p>　　酶誘導的轉鐵蛋白受體增加可導致細胞內鐵攝取和細胞毒性的增加。</p><p>　　炎 性 細 胞 的 作 用</p><p><b>　　白 細 胞</

138、b></p><p>　　腦出血后 6~12 小時在血腫周圍就出現(xiàn)白細胞浸潤，48~72 小時達到</p><p>　　高峰[27]。動物實驗也證實腦出血后 1~7d，血腫周圍有大量的多形核白細</p><p>　　胞，單核細胞浸潤[28]。Xue 等[29]研究表明，炎性反應不僅與腦出血引起</p><p>　　的腦細胞損傷有關，而且

139、炎性細胞浸潤與細胞死亡在時間上存在相關性。</p><p>　　其作用機制可能與減少血腫周圍的中性粒細胞、小膠質細胞和單核/巨噬</p><p>　　細胞數(shù)量及抑制其活性，降低腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,</p><p>　　TNF-α)等炎性細胞因子水平有關，從而減輕炎性反應所致繼發(fā)性腦損傷</p><p&

140、gt;<b>　　有關。</b></p><p><b>　　小 膠 質 細 胞</b></p><p>　　中樞神經(jīng)系統(tǒng)內的小膠質細胞與血源性單核巨噬細胞極為相似。小</p><p>　　膠質細胞反應可以在腦缺血后幾分鐘內發(fā)生，并產生大量白介素</p><p>　　1B(Interleukin-1

141、 beta, IL-1B)、白介素 6(Interleukin-6, IL-6)、TNF-α 等促炎</p><p>　　性細胞因子，加重腦水腫，加速神經(jīng)細胞死亡。</p><p>　　炎 性 介 質 作 用</p><p><b>　　IL-1</b></p><p>　　IL-1 是促炎性細胞因子，主要由單核巨噬細胞

142、和淋巴細胞產生。IL-1</p><p><b>　　18</b></p><p>　　分為 IL-1A 和 IL-1B 兩種構型，與細胞膜上 IL-1 受體(IL-1R)結合，通過</p><p>　　G 蛋白發(fā)揮作用。此外，體內還存在 IL-1 受體拮抗劑(IL-1ra)，它與 IL-1</p><p>　　競爭結合

143、 IL-1R，抑制 IL-1 的生物活性。</p><p><b>　　IL-6</b></p><p>　　IL-6 主要由 T 淋巴細胞、B 淋巴細胞、單核細胞、內皮細胞產生，</p><p>　　在腦組織中產生 IL-6 的細胞是星形細胞和小膠質細胞，它能夠刺激 T 淋</p><p>　　巴細胞增殖分化，促進 B

144、 淋巴細胞分化為漿細胞，在免疫應答和炎癥反</p><p>　　應中發(fā)揮重要作用，同時可以預測腦損傷程度及預后。</p><p><b>　　TNF</b></p><p>　　TNF 是促炎性細胞因子，TNF-α 為其主要亞型，主要由單核/巨噬細</p><p>　　胞產生。它不僅是一種有效的腫瘤殺傷因子，還是機體炎癥

145、及免疫應答</p><p>　　的重要調節(jié)因子。Castillo 等[30]發(fā)現(xiàn)，腦出血患者發(fā)病后 3~4d 內血腫周</p><p>　　圍水腫程度與出血后 24h 內 TNF-α 水平呈顯著正相關。Zhu 等[31]的研究</p><p>　　發(fā)現(xiàn)，TNF-α 能增強腦內皮細胞 NO 的毒性，增加血管內皮細胞通透性，</p><p>　　

146、發(fā)揮對 BBB 的破壞作用。</p><p><b>　　補 體 系 統(tǒng)</b></p><p>　　補體系統(tǒng)由 30 多種蛋白質組成，在正常情況下，腦組織內補體系統(tǒng)</p><p>　　處于平衡狀態(tài)。Hua 等[32]在動物實驗中發(fā)現(xiàn)，腦出血后血腫周圍組織補</p><p>　　體 C3d、C9 在 24h 后沉積增加

147、，同時 Clustein(凝聚素)在 72h 后也相應增</p><p>　　加，應用補體抑制劑 N-乙?？娠@著減輕腦出血后腦水腫。結果提示，補</p><p>　　體系統(tǒng)能促進炎癥反應，加重腦水腫。</p><p>　　細 胞 間 黏 附 分 子 -1</p><p>　　細胞間黏附分子-1(intercellular adhesion m

148、olecule-1, ICAM-1)是免疫</p><p>　　球蛋白超家族重要成員。實驗研究發(fā)現(xiàn)，在腦出血開始階段，局部黏附</p><p>　　分子表達的變化不明顯，至出血 14h 后腦水腫明顯發(fā)生時，出血周邊組</p><p>　　織即有明顯增高的 ICAM-1、選擇凝素-E 表達，腦出血后 24h 腦水腫達</p><p>　　到高峰

149、時，出血局部黏附分子陽性的細胞數(shù)量則更加增加。這表明出血</p><p><b>　　19</b></p><p>　　局部黏附分子的表達變化與腦水腫密切相關，且提示 ICAM-1 在腦出血</p><p>　　后病變局部的炎性反應中可能起主要作用。腦出血后病變局部及其周圍</p><p>　　血管內皮細胞通過黏附分子表

150、達上調促使中性粒細胞、巨噬細胞和淋巴</p><p>　　細胞等炎性細胞向腦組織浸潤，并產生大量的蛋白水解酶，使 BBB 的通</p><p>　　透性增加，導致血管源性腦水腫，加重腦損傷[33]。Goussev 等[34]研究發(fā)現(xiàn)，</p><p>　　應用選擇素-P 抗體(介導白細胞與內皮細胞的起始黏附)可縮小腦出血后</p><p>　

151、　的腦損傷范圍。使用抗 ICAM 單克隆抗體可減輕中性粒細胞介導的腦損</p><p><b>　　傷。</b></p><p>　　水 通 道 蛋 白 -4（ Aquaporin-4,AQP-4）</p><p>　　AQP-4 參與了各種原因如創(chuàng)傷、腦梗死、腦出血等所致的腦水腫的</p><p>　　形成，但對其在腦

152、水腫各個階段所起的作用意見尚不統(tǒng)一。Vizuete 等[35]</p><p>　　向大鼠腦組織中注入喹琳酸(N2 甲基 2D2 天門冬氨酸受體激動劑)可使病</p><p>　　灶區(qū)及同側紋狀體區(qū) AQP-4 mRNA 水平升高，血腦屏障破壞，提示 AQP-4</p><p>　　升高與同側紋狀體區(qū)血腦屏障的破壞有關。Kiening 等[36]研究發(fā)現(xiàn)腦損傷<