中藥王不留行對奶牛乳腺上皮細胞核蛋白質(zhì)組學(xué)的影響.pdf

1、深入研究奶牛泌乳功能的調(diào)控對解決我國奶牛業(yè)存在的產(chǎn)奶量低、乳品質(zhì)低等制約我國奶牛業(yè)發(fā)展的問題具有重要的理論價值和實際意義。傳統(tǒng)中草藥王不留行作為重要的催乳中藥之一，在臨床和畜牧業(yè)生產(chǎn)中得到廣泛的應(yīng)用。其可能具有雌激素樣活性，可激活泌乳信號途徑，進而通過調(diào)控乳蛋白、乳糖和乳脂等的合成而促進泌乳。但王不留行促進泌乳性能的作用機理尚不清楚，尤其是王不留行在奶牛乳腺組織中調(diào)控泌乳的分子機理尚未見報道。
　　 本研究應(yīng)用CASY細胞分析儀

2、檢測了不同作用時間下王不留行提取液對奶牛乳腺上皮細胞增殖和細胞活力的影響；從蛋白質(zhì)組學(xué)方面考慮王不留行提取液對奶牛乳腺上皮細胞核基質(zhì)蛋白質(zhì)的影響，建立奶牛乳腺上皮細胞核基質(zhì)蛋白雙向電泳方法，并且應(yīng)用雙向電泳(2-DE)結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)(MALDI-TOF-MS)鑒定王不留行提取液對奶牛乳腺上皮細胞核基質(zhì)蛋白的差異影響；應(yīng)用熒光定量PCR驗證差異蛋白在不同泌乳水平奶牛乳腺組織中的表達情況，從而深入探索其催乳機理。結(jié)果表明：①中草藥王不留行提取

3、液對原代培養(yǎng)的奶牛乳腺上皮細胞的增殖和細胞活力提高均顯著(P<0.05)，確定了王不留行提取液的體外最佳作用時間為24 h，明顯促進奶牛乳腺上皮細胞活力的增加，并增強細胞的增殖能力；②建立和優(yōu)化了乳腺上皮細胞核基質(zhì)蛋白雙向電泳方法，獲得蛋白斑點數(shù)多，重復(fù)性好的雙向電泳圖譜，為后續(xù)乳腺上皮細胞核蛋白質(zhì)組研究提供了方法性基礎(chǔ)；③通過添加中草藥王不留行提取液作用于奶牛乳腺上皮細胞，應(yīng)用雙向電泳結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)分析，成功篩選并鑒定了具有重要意義的5

4、種差異細胞核基質(zhì)蛋白，分別為：ethylmalonicencephalopathy1(ETHE1)，vesicle amine transport protein1 homolog(VAT1)，parkinson diseaseprotein7 homolog(Protein DJ-1)，proteasome subunit alpha type-2(PSMA2)和SUMO-activatingenzyme subunit1(SAE1)

5、，并且通過熒光定量RT-PCR的方法鑒定了其5個基因在轉(zhuǎn)錄水平上的表達差異情況；④通過熒光定量PCR的方法驗證其5個基因在不同泌乳水平奶牛乳腺組織中表達的差異性，表明這5個基因都可能與奶牛乳腺乳蛋白及乳脂合成具有潛在的關(guān)聯(lián)。以上試驗研究結(jié)果表明，王不留行可顯著提高乳腺上皮細胞的增殖和泌乳能力。首次從蛋白質(zhì)組學(xué)方面闡明了王不留行體外作用于奶牛乳腺上皮細胞的作用機理。揭示了王不留行促進乳腺泌乳和增殖的蛋白質(zhì)組學(xué)基礎(chǔ)，但是這5個差異蛋白的具體