中藥復(fù)方861對肝星狀細胞影響的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、肝纖維化是各種不同致病因子引起慢性肝病的共同病理基礎(chǔ),它是細胞外基質(zhì)增生和降解的失衡所致.中藥復(fù)方861是由丹參,黃芪等十味中藥組成,已經(jīng)有實驗和臨床研究資料表明它是治療肝纖維化、早期肝硬化的有效復(fù)方,它能明顯改善慢性肝炎患者臨癥狀,恢復(fù)肝功能,使纖維化血清指標明顯好轉(zhuǎn).近年來已有實驗證明了復(fù)方861可減少各型膠原在肝組織中的沉積,并能提高肝組織和血清中膠原酶活性并抑制金屬蛋白酶組織抑制物(TIMP)的mRNA的表達.該文運用蛋白質(zhì)組學(xué)

2、的方法,以肝星狀細胞為模式細胞,從蛋白質(zhì)水平進一步研究中藥復(fù)方861抗肝纖維化的作用機理.我們在豐度為80%左右的肝星狀細胞培養(yǎng)液中加入終濃度為1mg/ml的復(fù)方861作用48小時,并設(shè)對照組.收獲肝星狀細胞,提取蛋白質(zhì),用固相pH梯度雙向凝膠電泳方法進行蛋白質(zhì)點的分離,獲得分辨率和重復(fù)性均較好的雙向電泳銀染圖譜.結(jié)果顯示這些蛋白質(zhì)點等電點和分子量分布范圍廣,但大部分集中于等電點4-8,分子量10~20KDa和30~70KDa的區(qū)域.運

3、用PDquest軟件對掃描后的861給藥組和對照組雙向電泳圖象進行處理,經(jīng)斑點檢測,匹配和量化,檢測到800-900多個蛋白質(zhì)點,找到了部分表達量差異的蛋白質(zhì).選取了部分分辨較好的差異蛋白質(zhì)點和非差異蛋白質(zhì)進行原位胰蛋白酶酶解,用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)測定其膠內(nèi)酶解后的肽質(zhì)指紋圖譜,經(jīng)數(shù)據(jù)庫查詢,初步鑒定了39個顯著性表達差異的蛋白質(zhì)點和29個無表達差異的蛋白質(zhì)點.通過對這些鑒定的差異蛋白質(zhì)的功能分