瘦素對奶牛乳腺上皮細胞乳蛋白合成的調控作用研究.pdf

1、本論文采用荷斯坦奶牛乳腺上皮細胞體外培養(yǎng)、細胞生物學和分子生物學等技術手段，研究了leptin在有、無PRL的情況下對奶牛乳腺上皮細胞乳蛋白合成的調控作用。研究結果分如下三個部分：
　　1.在體外采用酶消化法成功分離并培養(yǎng)了奶牛乳腺上皮細胞，利用細胞對胰酶的敏感度進行了純化和傳代培養(yǎng)，并將三代細胞凍存。對細胞特有的骨架蛋白-角蛋白進行免疫熒光細胞染色，確定為乳腺上皮細胞。對復蘇的細胞進行了存活率檢測。在倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)為鵝

2、卵石樣成團貼壁生長。結果顯示，此方法得到的細胞可以用于后續(xù)試驗的研究。
　　2.在建立奶牛乳腺上皮細胞體外培養(yǎng)體系的基礎上，進行處理。分別設置有無(+、-)PRL的兩個對照組（leptin為0 ng/mL）和各自對應的3個處理組（leptin分別為10、100、和1000ng/mL）。利用MTT法檢測乳腺上皮細胞增殖結果顯示，在有、無PRL的條件下leptin呈時間依賴性促進乳腺上皮細胞增殖。且同一時間，有PRL時，高濃度（100

3、0 ng/mL）leptin處理組顯著抑制細胞增殖，10和100 ng/mL leptin處理組顯著促進增殖，但是無PRL時，leptin的作用不顯著。
　　3.細胞的處理同第二部分，采用實時熒光定量PCR技術研究leptin對奶牛乳腺上皮細胞中主要乳蛋白及其主要調控激素 PRL的受體和主要信號轉導因子基因表達的影響，并利用Elisa試劑盒測定主要酪蛋白的合成情況。試驗結果表明：(1) leptin在有PRL的條件下才促進乳蛋白基

4、因的表達，且促進作用隨leptin濃度變化而不同。（2）有PRL的條件下，1000 ng/mL leptin抑制PRL受體基因的表達，但PRL明顯誘導其表達。（3）信號轉導因子JAK2的基因表達與乳蛋白一致，而STAT5沒有顯著變化。（4）leptin對α-酪蛋白合成沒有影響，在有PRL的條件下，10 ng/mL leptin處理組顯著促進β-酪蛋白的合成，1000ng/mL處理組則顯著抑制。
　　本試驗對 leptin在奶牛乳腺