油菜細(xì)胞核雄性不育基因Bnms3的克隆及功能標(biāo)記開(kāi)發(fā).pdf

1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文油菜細(xì)胞核雄性不育基因Bnms3的克隆及功能標(biāo)記開(kāi)發(fā)姓名：李季申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：作物遺傳育種指導(dǎo)教師：楊光圣201206華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2012屆博士學(xué)位論文BnMs3的目標(biāo)基因，其DNA序列及預(yù)測(cè)的編碼蛋白均與擬南芥基因At5916620(Tic40)高度同源，因此將BnMs3命名為BnaC9TIC40a，突變體Bnms3命名為bnaC9tic40a一2，位于A10染色體的高度同源基因則命名為BnaAl0TI

2、C40a。序列分析表明BnaC9TIC40a含有14個(gè)外顯子，編碼一個(gè)包含455個(gè)氨基酸殘基的蛋白，具有絲氨酸／N氨酸富集結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域、TPR結(jié)構(gòu)域和Stilp／Hop／Hip結(jié)構(gòu)域等4個(gè)保守結(jié)構(gòu)域。RTPCR的分析表明，BnaC9TIC40a在9012B的15級(jí)雄蕊、根、莖、葉和花瓣等各個(gè)組織中均存在表達(dá)，bnaC9tic40a一2和BnaAl0TIC40a在9012B和9012A的各個(gè)組織中亦存在表達(dá)。5從BnMs3野生型材料

3、(9012F)，Bnms3突變型材料(9012A和臨保系T45)，以及兩個(gè)同源BAC克隆中分別分離兩側(cè)最近標(biāo)記錨定的序列，比較發(fā)現(xiàn)9012A中候選區(qū)間序列與來(lái)源于C9染色體的目標(biāo)克隆JBnB043L23的相似性僅為791％，但與來(lái)源于A10染色體的同源克隆JBnB004A17之問(wèn)相似性卻為855％。相反，9012F中候選區(qū)間序列與JBnB043L23具有933％的相似性，與JBnB004A17之間相似性僅為808％。該數(shù)據(jù)暗示著9012

4、A中Bnms3等位基因型很可能是由甘藍(lán)型油菜中AIO與C9染色體問(wèn)的同源重組(homologousrecombination)而致。而來(lái)源于臨保系T45的候選區(qū)間序列與JBnB043L23之間的相似度高達(dá)999％，表明其內(nèi)的Bnms3等位基因型是由BnMs3等位基因型的少量堿基自然變異所致。因此，不育基因型Bnms3存在兩種不同的單倍型。6臨保系T45與野生型材料Tapidor之間在BnaC9TIC40a內(nèi)部只存在2bp的缺失變異，根據(jù)

5、該處堿基變異設(shè)計(jì)的InDel標(biāo)記RCPl70UR能夠很好的區(qū)分臨保系來(lái)源的Bnms3與其它所有材料，表明標(biāo)記RCPl70L／R為臨保系T45中Bnms3單倍型的功能標(biāo)記。而基于9012A和野生型材料Tapidor及9012F中BnaC9TIC40a序列差異處開(kāi)發(fā)的共顯性標(biāo)記RCPl70L23／R2能夠很好的區(qū)分9012A與其他所有材料。因此，原則上，上述兩個(gè)標(biāo)記可準(zhǔn)確的鑒別任何分離群體中BnMs3位點(diǎn)的基因型。關(guān)鍵詞：甘藍(lán)型油菜；隱性細(xì)