油菜細胞核雄性不育基因Bnms3的克隆及功能標記開發(fā).pdf

1、華中農業(yè)大學博士學位論文油菜細胞核雄性不育基因Bnms3的克隆及功能標記開發(fā)姓名：李季申請學位級別：博士專業(yè)：作物遺傳育種指導教師：楊光圣201206華中農業(yè)大學2012屆博士學位論文BnMs3的目標基因，其DNA序列及預測的編碼蛋白均與擬南芥基因At5916620(Tic40)高度同源，因此將BnMs3命名為BnaC9TIC40a，突變體Bnms3命名為bnaC9tic40a一2，位于A10染色體的高度同源基因則命名為BnaAl0TI

2、C40a。序列分析表明BnaC9TIC40a含有14個外顯子，編碼一個包含455個氨基酸殘基的蛋白，具有絲氨酸／N氨酸富集結構域、跨膜結構域、TPR結構域和Stilp／Hop／Hip結構域等4個保守結構域。RTPCR的分析表明，BnaC9TIC40a在9012B的15級雄蕊、根、莖、葉和花瓣等各個組織中均存在表達，bnaC9tic40a一2和BnaAl0TIC40a在9012B和9012A的各個組織中亦存在表達。5從BnMs3野生型材料

3、(9012F)，Bnms3突變型材料(9012A和臨保系T45)，以及兩個同源BAC克隆中分別分離兩側最近標記錨定的序列，比較發(fā)現9012A中候選區(qū)間序列與來源于C9染色體的目標克隆JBnB043L23的相似性僅為791％，但與來源于A10染色體的同源克隆JBnB004A17之問相似性卻為855％。相反，9012F中候選區(qū)間序列與JBnB043L23具有933％的相似性，與JBnB004A17之間相似性僅為808％。該數據暗示著9012

4、A中Bnms3等位基因型很可能是由甘藍型油菜中AIO與C9染色體問的同源重組(homologousrecombination)而致。而來源于臨保系T45的候選區(qū)間序列與JBnB043L23之間的相似度高達999％，表明其內的Bnms3等位基因型是由BnMs3等位基因型的少量堿基自然變異所致。因此，不育基因型Bnms3存在兩種不同的單倍型。6臨保系T45與野生型材料Tapidor之間在BnaC9TIC40a內部只存在2bp的缺失變異，根據

5、該處堿基變異設計的InDel標記RCPl70UR能夠很好的區(qū)分臨保系來源的Bnms3與其它所有材料，表明標記RCPl70L／R為臨保系T45中Bnms3單倍型的功能標記。而基于9012A和野生型材料Tapidor及9012F中BnaC9TIC40a序列差異處開發(fā)的共顯性標記RCPl70L23／R2能夠很好的區(qū)分9012A與其他所有材料。因此，原則上，上述兩個標記可準確的鑒別任何分離群體中BnMs3位點的基因型。關鍵詞：甘藍型油菜；隱性細