煙草炭疽病菌的分子檢測(cè)與煙草品種抗病性研究.pdf

1、煙草是山東省重要的經(jīng)濟(jì)作物之一，該病害一直是影響烤煙優(yōu)質(zhì)穩(wěn)產(chǎn)的重要限制因素。煙草炭疽病是煙草的重要的侵染性病害，此病在煙草各生育期皆可發(fā)生，但以苗期發(fā)生普遍而嚴(yán)重。幼苗葉片病斑密布，嚴(yán)重發(fā)病時(shí)往往使整片煙苗毀掉。在防治煙草炭疽病方面，目前在生產(chǎn)上主要采用農(nóng)業(yè)防治和藥劑防治。缺乏特效的藥劑和抗性品種，本研究對(duì)山東省主產(chǎn)煙區(qū)采集到得煙草炭疽病菌進(jìn)行了分離鑒定和分子生物學(xué)檢測(cè)，并對(duì)17個(gè)煙草種質(zhì)資源進(jìn)行了煙草炭疽病的抗性鑒定。為煙草炭疽病的診

2、斷和防治提供了理論基礎(chǔ)，為抗病育種的了提供科學(xué)依據(jù)。本研究主要得到以下結(jié)果：
　　 1.煙草炭疽病的病原鑒定：通過(guò)癥狀觀察、病原物的分離、致病性測(cè)定、形態(tài)學(xué)觀察和5.8SrDNA－ITS序列分析，我們鑒定出山東主產(chǎn)煙區(qū)煙草炭疽病病原菌為毀滅炭疽菌(Colletotrichum destructivum O'Gara)。病原菌菌落為圓形，起初為灰白色，后期顏色稍深，分生孢子盤黑褐色，著生身生孢子梗和剛毛；剛毛很褐色，散生，有分割；

3、分生孢子為長(zhǎng)圓筒形兩端鈍圓，單胞，無(wú)色。根據(jù)ITS rDNA構(gòu)筑供試菌株與其他炭疽菌屬真系統(tǒng)進(jìn)化樹中與毀滅炭疽菌聚于同一分支。
　　 2.建立了一套快速、高效的檢測(cè)鑒定煙草炭疽病菌的PCR方法。本研究以采自山東煙區(qū)的煙草炭疽病菌為目的菌株，提取基因組DNA，設(shè)計(jì)了一對(duì)特異引物Co1/Co2用于C.destructivum的分子檢測(cè)。利用該引物對(duì)包括C.destructivum在內(nèi)的13個(gè)煙草病原菌菌株的基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增

4、，結(jié)果表明：只有C.destructivum能擴(kuò)增到特異性條帶，其它菌株及陰性對(duì)照均無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物。對(duì)煙草組織和土壤的檢測(cè)結(jié)果也表明，該對(duì)引物能特異性的檢測(cè)到C.destructivumm基因組DNA的存在。該引物對(duì)C.destructivum基因組DNA檢測(cè)的靈敏度為0.01pg/μL。
　　 3.對(duì)來(lái)自田間的土壤樣品進(jìn)行了實(shí)際檢測(cè)，證明了所建立的PCR檢測(cè)體系是穩(wěn)定可靠的。分別檢測(cè)體系對(duì)來(lái)自山東蒙陰、沂水、莒縣等地8個(gè)田間土壤樣

5、品進(jìn)行實(shí)際檢測(cè)，結(jié)果與田間發(fā)病情況基本一致，證明所建立的PCR檢測(cè)體系是穩(wěn)定可靠的。
　　 4.通過(guò)采用不同的接種濃度和接種苗齡等對(duì)煙草品種對(duì)煙草炭疽病的苗期抗病性進(jìn)行了測(cè)定，對(duì)其表現(xiàn)進(jìn)行比較，篩選出一套適用于煙草苗期的快速準(zhǔn)確的抗病性鑒定方法。煙草炭疽病苗期抗病性鑒定，采用1×108cfu/mL的病原菌懸浮液，在苗齡六周期進(jìn)行噴霧接種，能較好地表現(xiàn)發(fā)病情況，接種后第9天調(diào)查發(fā)病情況，能夠反映不同材料對(duì)炭疽病的抗病性差異。