RNA介導抗性轉基因煙草植株的抗病性分析.pdf

1、Y1 0 9 3 9 5 9H 糞q Q 7 8 授} 學＆單位代日“ 究±學{ ：：山柬蓑掌太學碩士學位論文R N A 介導抗性轉基因煙草植株的抗病性分A n a l y s i s o f t h eR e s i s t a n c eM e d i a t e db yR N AT r a n s g e n i cT o b a c c o P l a n t s研究生 武曉亮學科專業(yè)：生物化學與分子生物學研究方向：

2、植物分子生物學學 院：生命科學學院指導教師：郭興啟教授2 0 0 7 年6 月1 0 日山東農業(yè)大學碩士學位論文摘要近年來，基因工程技術的發(fā)展給植物抗病毒育種開辟了新途徑，人們利用病毒本身的基因( 如外殼蛋白基因、復制酶基因等) 經體外重組后轉移到植物中，從而獲得抗病毒的轉基因植物，這一策略就是病原誘導抗性。研究發(fā)現(xiàn)，病原誘導抗性的機制之一就是R N A 沉默介導的抗性。利用轉基因R N A 沉默技術進行植物抗病毒育種方面的應用已成為這

3、一領域的研究熱點，越來越多基于R N A 沉默技術的抗病毒植株問世。這種技術抗病性強，抗病持久的特點被肯定的同時，其安全性及穩(wěn)定性也成為了人們爭論的焦點。本研究在已獲得的轉非翻譯p v y NC P 序列高度抗病株系M 1 1 的基礎上，研究了其抗病性在T 4 代植株中的穩(wěn)定性，及其與寄主相關基因的關系，主要實驗結果如下：1 ．獲得了發(fā)生R N A 沉默的T 4 代M l l 轉基因高抗植株。通過攻毒實驗證明了M 1 1 的高度抗病性可

4、以穩(wěn)定地遺傳到T 4 代。用N o r t h e r n 雜交的方法證明，轉基因積累和其抗病性呈負相關，T 4 代M l l 的植株發(fā)生了R N A 沉默，其高度抗病性是由R N A 沉默介導的。2 ，N t R d R P I 參與了M 1 l 株系的R N A 沉默過程。我們克隆了N t R d R P l 的一段9 9 5 b p 的中聞片段作探針，對轉基因植株進行了N o r t h e r n雜交。結果表明，Ⅳr R 積P

5、』在發(fā)生R N A 沉默的M 1 1 植株中的表達量明顯高于未發(fā)生沉默的M 5 3 轉基因植株及野生型N C 8 9 植株，初步證明N t R d R P l 參與了R N A 沉默及其介導的病毒抗性。3 ．低溫打破R N A 沉默及其介導的抗病性。不同溫度下的攻毒實驗證明，常溫條件下原本高度抗病的M l l 植株在低溫條件下時( 1 0 或1 5 。C ) ，完全喪失了抗病性；N o r t h e r n 雜交實驗證明R N A 沉