RNA介導(dǎo)抗性轉(zhuǎn)基因煙草植株的抗病性分析.pdf

1、Y1 0 9 3 9 5 9H 糞q Q 7 8 授} 學(xué)＆單位代日“ 究±學(xué){ ：：山柬蓑掌太學(xué)碩士學(xué)位論文R N A 介導(dǎo)抗性轉(zhuǎn)基因煙草植株的抗病性分A n a l y s i s o f t h eR e s i s t a n c eM e d i a t e db yR N AT r a n s g e n i cT o b a c c o P l a n t s研究生 武曉亮學(xué)科專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究方向：

2、植物分子生物學(xué)學(xué) 院：生命科學(xué)學(xué)院指導(dǎo)教師：郭興啟教授2 0 0 7 年6 月1 0 日山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要近年來，基因工程技術(shù)的發(fā)展給植物抗病毒育種開辟了新途徑，人們利用病毒本身的基因( 如外殼蛋白基因、復(fù)制酶基因等) 經(jīng)體外重組后轉(zhuǎn)移到植物中，從而獲得抗病毒的轉(zhuǎn)基因植物，這一策略就是病原誘導(dǎo)抗性。研究發(fā)現(xiàn)，病原誘導(dǎo)抗性的機(jī)制之一就是R N A 沉默介導(dǎo)的抗性。利用轉(zhuǎn)基因R N A 沉默技術(shù)進(jìn)行植物抗病毒育種方面的應(yīng)用已成為這

3、一領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，越來越多基于R N A 沉默技術(shù)的抗病毒植株問世。這種技術(shù)抗病性強(qiáng)，抗病持久的特點(diǎn)被肯定的同時，其安全性及穩(wěn)定性也成為了人們爭論的焦點(diǎn)。本研究在已獲得的轉(zhuǎn)非翻譯p v y NC P 序列高度抗病株系M 1 1 的基礎(chǔ)上，研究了其抗病性在T 4 代植株中的穩(wěn)定性，及其與寄主相關(guān)基因的關(guān)系，主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：1 ．獲得了發(fā)生R N A 沉默的T 4 代M l l 轉(zhuǎn)基因高抗植株。通過攻毒實(shí)驗(yàn)證明了M 1 1 的高度抗病性可

4、以穩(wěn)定地遺傳到T 4 代。用N o r t h e r n 雜交的方法證明，轉(zhuǎn)基因積累和其抗病性呈負(fù)相關(guān)，T 4 代M l l 的植株發(fā)生了R N A 沉默，其高度抗病性是由R N A 沉默介導(dǎo)的。2 ，N t R d R P I 參與了M 1 l 株系的R N A 沉默過程。我們克隆了N t R d R P l 的一段9 9 5 b p 的中聞片段作探針，對轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行了N o r t h e r n雜交。結(jié)果表明，Ⅳr R 積P

5、』在發(fā)生R N A 沉默的M 1 1 植株中的表達(dá)量明顯高于未發(fā)生沉默的M 5 3 轉(zhuǎn)基因植株及野生型N C 8 9 植株，初步證明N t R d R P l 參與了R N A 沉默及其介導(dǎo)的病毒抗性。3 ．低溫打破R N A 沉默及其介導(dǎo)的抗病性。不同溫度下的攻毒實(shí)驗(yàn)證明，常溫條件下原本高度抗病的M l l 植株在低溫條件下時( 1 0 或1 5 。C ) ，完全喪失了抗病性；N o r t h e r n 雜交實(shí)驗(yàn)證明R N A 沉