甜瓜與西瓜F1品種種子遺傳純度的分子檢測(cè).pdf

1、甜瓜和西瓜是重要的瓜菜，具有顯著的雜種優(yōu)勢(shì)，一代雜交種長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)、抗逆性好、產(chǎn)量高、果實(shí)品質(zhì)好、耐貯藏等，在生產(chǎn)中已廣泛使用。由于大部分雜交種是人工制種，純度難以控制。常規(guī)的種子純度鑒定主要采用田間(植)株形態(tài)鑒定等方法，該方法周期長(zhǎng)、工作量大、需要耗費(fèi)大量的人力物力、受季節(jié)影響、人工觀察難免目測(cè)誤差。因此，迅速、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便檢測(cè)西甜瓜種子的遺傳純度成為種子工作中十分重要的課題。
　　 本研究以西瓜與甜瓜為材料，對(duì)影響PCR反應(yīng)的主要

2、因子—Mg2+、dNTPs和引物濃度進(jìn)行分析，優(yōu)化建立起RAMP反應(yīng)體系。分別設(shè)計(jì)3個(gè)濃度梯度:Mg2+為0.8，2.0，4.0 mmol·L-1; dNTPs為0.08，0.2，0.4 mmol·L-1;引物為0.08，0.16，0.32μmol·L-1。篩選出對(duì)于西、甜瓜的RAMP優(yōu)化體系為(20μl):引物0.32μmol·L-1，dNTPs0.2 mmol·L-1，Mg2+2.0 mmol·L-1，DNA10 ng，Taq DN

3、A聚合酶0.8U;同時(shí)對(duì)PCR反應(yīng)擴(kuò)增程序中的退火溫度進(jìn)行了研究。結(jié)果表明在RAMP-PCR反應(yīng)中，退火溫度在38-50℃范圍內(nèi)擴(kuò)增效果差異明顯，其中退火溫度44℃適合于西瓜RAMP分析，而甜瓜RAMP-PCR分析最適退火溫度為43℃。
　　 綜合運(yùn)用RAPD、SRAP與RAMP三種分子標(biāo)記技術(shù)，對(duì)甜瓜一代雜交品種‘海蜜2號(hào)’進(jìn)行了遺傳純度分析。共選用358個(gè)引物(組合),其中96對(duì)SRAP、118對(duì)RAMP、144個(gè)RAPD，

4、對(duì)‘海蜜2號(hào)’雜交種及其親本進(jìn)行特異標(biāo)記篩選。選出了2對(duì)SRAP引物組合(em6/fc8和em7/pm36)、2對(duì)RAMP引物組合(RP193/rm24和RP538/m1)與2個(gè)RAPD引物(RP204和RP401)，能在F1單株中擴(kuò)增出父、母本特異標(biāo)記，用于進(jìn)行雜交一代種子遺傳純度鑒定。綜合3種分子標(biāo)記的結(jié)果，在210個(gè)單株中，em6/fc8、em7/pm36、RP193/rm24、RP204與RP4015個(gè)引物（組合）檢測(cè)到6個(gè)單株

5、是假雜種;而組合RP538/m1只發(fā)現(xiàn)5個(gè)單株是假雜種，這可能是因?yàn)楦改副具€存在一些雜合位點(diǎn)。綜合標(biāo)記分析，可以確定這6個(gè)單株是假雜種，甜瓜雜交種‘海蜜2號(hào)’種子批的遺傳純度為97.1％。本研究結(jié)果與田間鑒定結(jié)果高度一致，表明利用多種分子標(biāo)記進(jìn)行雜交一代種子的遺傳純度檢測(cè)，可以克服單一分子標(biāo)記分析的缺點(diǎn)，而且簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確性高。
　　 以西瓜雜交種‘蘇蜜5號(hào)’及其親本為材料，利用SRAP、RAMP與RAPD3種分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)其

6、進(jìn)行了遺傳純度分析。從152對(duì)SRAP引物組合、200對(duì)RAMP引物組合、300個(gè)隨機(jī)RAPD引物篩選出2對(duì)SRAP引物組合（em1/pm36和em7/sa20)、2對(duì)RAMP引物組合（RP560/N4和RP538/K46）和2個(gè)RAPD引物（RP976和 RP1077)，可在F1雜種中同時(shí)產(chǎn)生父、母本特異條帶。利用這6個(gè)引物（組合）對(duì)‘蘇蜜5號(hào)’F1雜種單株進(jìn)行了檢測(cè)。綜合3種分子標(biāo)記的結(jié)果，在210個(gè)F1單株中有7個(gè)單株表現(xiàn)為假雜種