五種病害相關(guān)植原體的分子鑒定.pdf

1、本論文利用分子生物學(xué)手段對棣棠叢枝病、鳳仙花綠瓣病、迎春叢枝病、黃刺梅叢枝病、小葉女貞從枝病病原進行分子檢測與鑒定。
　　 用植原體16S rRNA基因和tuf基因通用引物，對表現(xiàn)叢枝癥狀的棣棠DNA進行巢式PCR擴增，分別得到了約1.2kb和800bp的特異性片段。序列分析表明：與棣棠叢枝相關(guān)植原體(KWB)的16SrRNA基因和tuf基因均與翠菊黃化植原體組(16SrI)D亞組泡桐叢枝株系一致率最高，為99.4％和99.6％

2、。在系統(tǒng)進化樹中，KWB也與16SrI－D亞組分離物聚類到一起。利用虛擬RFLP分析發(fā)現(xiàn)，KWB的16S rRNA基因AluⅠ、HhaⅠ、MseⅠ、TaqⅠ限制性酶切圖譜與16SrI－D業(yè)組植原體一致。以上結(jié)果表明，與棣棠叢枝病相關(guān)的植原體屬于16SrI－D亞組。
　　 利用植原體16S rRNA和核糖體蛋白基因(rp)通用引物從表現(xiàn)綠瓣癥狀的鳳仙花DNA中分別擴增得到了約1.24kb和1.21kb的特異性片段。序列測定和分析的

3、結(jié)果表明，與鳳仙化綠瓣病(Balsamine virescence，BV)相關(guān)植原體的16S rRNA基因和rp基因均與翠菊黃化植原體組(16SrI)泡桐叢枝株系(16SrI-D亞組)一致率最高，為99.7％。在系統(tǒng)進化樹中，BV也與16SrI-D亞組分離物聚類到一起。利用虛擬RFLP分析發(fā)現(xiàn)，BV限制性酶切圖譜與16SrI-D亞組植原體一致。本研究首次從分子水平上證明與鳳仙花綠瓣病相關(guān)的植原體屬于16SrI－D亞組。
　　 對

4、表脫叢枝癥狀的迎春枝條的韌皮部進行超薄切片及電鏡觀察，發(fā)現(xiàn)大量典型植原體。通過對16S rRNA基因和rp基因序列分析發(fā)現(xiàn)，與迎春叢枝相關(guān)植原體(JNWB)的16S rRNA基因和rp基因均與翠菊黃化植原體組(16SrI)D亞組泡桐叢枝株系一致率最高，為99.6％和99.7％。在系統(tǒng)進化樹中，JNWB也與16SrI－D亞組分離物聚類到一起。利用虛擬RFLP分析發(fā)現(xiàn)，JNWB的16SrRNA基因17種限制性酶切圖譜與16SrI－D業(yè)組植原

5、體一致。以上結(jié)果表明，JNWB屬于16SrI－D亞組。與迎春叢枝病相關(guān)的植原體屬于16SrI－D亞組。
　　 以表現(xiàn)叢枝癥狀的黃刺梅枝條總DNA為模板進行巢式PCR擴增，得到了約1.24kb的16S rRNA基因片段、800bp的tuf基因片段和1.21kb的rp基因片段，將此植原體命名為黃刺梅叢枝植原體(Rosa xanthina wiches’－broom phytoplasma，RXWB)。對獲得的序列與NCBI數(shù)據(jù)庫中相

6、關(guān)植原體序列進行一致率分析，發(fā)現(xiàn)與翠菊黃化組(16SrI組)植原體一致率較高，其中與16SrI－D組的一致率分別高達99.8％、99.9％、99.8％。在系統(tǒng)進化樹中.RXWB與16SrI－D亞組中的植原體聚為一簇。利用iphyClassifier在線軟件模擬RFLP分析，發(fā)現(xiàn)RXWB與16SrI－D亞組FJ263621的酶切圖譜一致。所有證據(jù)表明RXWB屬于16SrI－D亞組。
　　 從表現(xiàn)叢枝等癥狀的小葉女貞的總DNA中，克