山東省桑萎縮、棗瘋病及其它三種植原體的分子檢測(cè)與鑒定.pdf

1、本論文利用分子生物學(xué)手段對(duì)與山東省桑黃化型萎縮病、棗瘋病、苦楝叢枝、莧菜褪綠和國(guó)槐叢枝相關(guān)的植原體進(jìn)行了檢測(cè)與鑒定。
　　 對(duì)采自山東泰安、寧陽(yáng)、新泰的表現(xiàn)黃化、萎縮癥狀的桑樹(shù)植株總DNA進(jìn)行secY基因PCR擴(kuò)增，分別得到約1.4kb的特異片段，將片段克隆后進(jìn)行序列測(cè)定，表明該片段長(zhǎng)1361bp，包含secY基因1242bp，編碼414個(gè)氨基酸。通過(guò)構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)、同源性比對(duì)及利用9種限制性?xún)?nèi)切酶進(jìn)行模擬RFLP分析，初步確定

2、該植原體屬于secYI-B亞組，在亞組水平上進(jìn)一步明確了桑黃化型萎縮病植原體的分類(lèi)地位。secA基因擴(kuò)增得到842bp的目的片段，編碼280個(gè)氨基酸，基于secA基因的分析結(jié)果表明桑黃化型萎縮病植原體屬于16SrI-B亞組，與基于16S rRNA分析結(jié)果一致。
　　 利用FD9f/r引物對(duì)采自山東11個(gè)地區(qū)的棗瘋病樣品進(jìn)行secY基因的PCR擴(kuò)增，并進(jìn)行了序列測(cè)定，結(jié)果表明，該特異片段大小為1421bp，對(duì)獲得的序列與NCBI數(shù)

3、據(jù)庫(kù)中相關(guān)植原體序列進(jìn)行同源性分析、構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)和模擬RFLP分析，結(jié)果顯示山東棗瘋病植原體屬于secYV-C亞組，與secYV-B亞組的櫻桃致死黃化（CLY5）和secYV-N亞組的桃樹(shù)致死黃化印度分離株系（PY-In）的親緣關(guān)系最近，在亞組水平上進(jìn)一步明確了山東棗瘋病植原體的分類(lèi)地位。secA基因擴(kuò)增得到836bp的特異片段，編碼277個(gè)氨基酸，分析結(jié)果表明棗瘋病植原體屬于16SrV組，與已報(bào)道結(jié)果一致。
　　 對(duì)莧菜褪綠

4、植原體進(jìn)行tuf、secY和secA基因的PCR擴(kuò)增，分別得到大小約0.8 kb、1.4 kb和0.8 kb的目的片段并進(jìn)行了序列測(cè)定。通過(guò)序列同源性比對(duì)、構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)及模擬RFLP分析，確定該植原體屬于tufI-B和secYI-B亞組，并發(fā)現(xiàn)其基因序列與桑黃化型萎縮病植原體高度同源。
　　 以山東苦楝叢枝病病株總DNA為模板，進(jìn)行PCR擴(kuò)增和序列測(cè)定，分別得到16S rRNA(1432 bp)、核糖體蛋白基因rp(1240

5、bp)、延伸因子基因tuf(842 bp)、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因secY(1361 bp)和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因secA(842 bp)的序列。對(duì)獲得的序列與NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中相關(guān)植原體序列進(jìn)行同源性分析、構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)和RFLP分析，結(jié)果顯示山東苦楝叢枝植原體屬于16SrI-B、rpI-B、tufI-B、secYI-L亞組。
　　 通過(guò)電鏡觀察和PCR檢測(cè)，證明國(guó)槐叢枝病的病原為植原體，通過(guò)對(duì)16S rRNA基因、rp基因、secY基因和sec